东平湖麦穗鱼群体遗传结构的微卫星标记分析:微卫星标记

　　摘 要： 利用微卫星标记技术，采用26对鲤微卫星引物对山东东平湖麦穗鱼进行全基因组扫描．结果表明，有13对引物能获得稳定的特异性条带(占总数的50％)，其中有6个微卫星位点具有多态性(占总数的23．1％)。6个多态位点共检测到22个等位基因，每个位点的等位基因数从2个到7个不等，大小在80～406bp之间；平均多态信息含量(PIC)为0．5115，平均观测杂合度(H0)为0．6812，平均期望杂合度(HE)为0．5775。研究结果表明，东平湖麦穗鱼群体遗传多样性较丰富，种群结构合理，种质资源处于安全状态。
　　关键词：微卫星标记；麦穗鱼；杂合度
　　中图分类号：Q959
　　文献标识码：A
　　文章编号：1007―7847(2006)01―0067―04
　　麦穗鱼(Pseudorasbora parva Temminck et Schleget)属鲤科(Cyprinidae)、的亚科(Gobioninae)、 麦穗鱼属(PseudorasboraBleeker)，是一种常见的小 型鱼类，广泛分布于朝鲜、日本及我国的主要淡水水 域中。麦穗鱼主要以底栖动物为食，同时摄取大量 的藻类。胡建华等(1998)利用麦穗鱼清除宝 钢工业废水池壁的藻类复合体，结果表明这种方 法是有效的。目前，在许多湖泊，特别是大中型湖 泊，因社会、经济和管理等多方面的原因，大型经 济鱼类的单产比较低，鱼食性鱼类(Piscivorous fish)资源也因过度捕捞而受到严重破坏，生态环 境非常有利于小型鱼类的繁衍和发展。因此，在 这类湖泊开展小型鱼类种群结构及遗传多样性研 究，能为合理开发利用小型鱼类资源，发展鱼食性 鱼类增养殖，优化湖泊渔业结构提供重要的基础 资料。
　　有关麦穗鱼分子生物学方面的研究报道较 少。尚未见微卫星(MicmsateUite)标记在麦穗 鱼基因组中应用的报道。微卫星标记与其它的 遗传标记(同工酶、RAPD等)相比，具有较高的突 变率，已被广泛应用于鲤鱼、鲑鱼、和泰山螭 霖鱼等鱼类中。本研究利用微卫星标记技术对东 平湖麦穗鱼群体的遗传结构进行研究，以期为合 理开发利用东平湖麦穗鱼资源提供理论依据。
　　
　　1 材料与方法
　　
　　1．1 材料
　　麦穗鱼共35尾，于2004年12月11日采集 于山东东平湖。
　　
　　1，2 基因组DNA提取
　　提取方法见参考文献。
　　
　　1.3 PCR反应与产物检测
　　PCR反应体系：DNA模板0．7 μL；上下游引 物终浓度均为0.6 1μmol／L；Mg2+浓度(见表1)； dNTPs浓度为200 1xmol／L；0，625U TaqDNA聚 合酶；10xPCRbuffer 2．5μL；补充灭菌双蒸水至 终体积25μL。
　　PCR反应程序：94℃预变性4min，94℃变性 30s，退火(温度见表1)50s，72℃延伸50s，30个 循环；再于72℃延伸7min．扩增产物用2％的琼 脂糖凝胶检测，鉴定有扩增产物后再用12％的非 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，银染，并用数码相 机拍照保存。
　　
　　1，4 数据分析
　　根据每个个体产生的条带位置，利用Lablm－ age(Version 2．7．2)软件辅助确定基因型并计算 等位基因大小，利用POPGENE32(Version 1．31) 软件计算微卫星座位的等位基因频率(p)、多态 信息含量(PIC)和基因杂合度(H)等，
　　其中，Pi、只是某位点第i、j个等位基因的基 因频率，n为某一位点上的等位基因数。
　　
　　2 结果
　　
　　2.1 微卫星引物筛选
　　本研究采用26对普通鲤鱼的微卫星引物对 东平湖麦穗鱼的基因组DNA进行PCR扩增，结 果有13对引物能够获得稳定的可重复的扩增条 带，占引物总数的50％。通过优化PCR扩增条 件、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)参数，有6对微 卫星引物表现出个体多态性(表1)，多态引物占 引物总数的23．1％。
　　
　　2．2 各微卫星位点的等位基因
　　表2中列出了麦穗鱼群体在各个微卫星位点 的等位基因数目。6个微卫星位点共检测到22个 等位基因，每个位点平均为3．7个，最多为7个 (MFWl)，最少为2个(HLJ006等)，等位基因大 小在80-406bp之间。
　　
　　2．3 多态信息含量和基因杂合度
　　表2中还列出了各微卫星位点的多态信息含 量和基因杂合度。6个微卫星位点的平均多态信 息含量为0，5115，平均观测杂合度为0，6812，平 均期望杂合度为0，5775，表明这6个微卫星位点 在东平湖麦穗鱼群体中具有较高的多态性。
　　
　　3　讨论
　　微卫星的一个潜在价值是从一个物种产生的 引物可应用于相关的物种。因此，利用DNA数 据库(GENBAND，EMBL等)，从相关物种的微卫 星引物中筛选并应用于一个物种是可行的。David 等(2001)用47对鲤微卫星引物对一种草鱼白 化突变体进行分析，结果表明有23对引物(49％) 适用于草鱼基因分型研究，邵昭君等(2002) 用2l对铲鲟微卫星引物对中华鲟基因组DNA进 行PCR扩增，有14对(67％)引物得到了扩增产 物，其中有10对(48％)表现出多态性，并获得了 中华鲟的2个微卫星位点。本文利用26对鲤微 卫星引物对山东东平湖麦穗鱼进行全基因组扫 描，有13对引物能获得稳定的特异性条带(占总 数的50％)(图1)，有6个微卫星位点具有多态性 (占总数的23．1％)。这与鲤微卫星引物在东平湖 黄颡鱼中的检测结果一致。
　　从实验结果来看，6个微卫星位点的平均等 位基因数为3.7个，最多为7个，最少为2个，这比 鲤鱼、鲫鱼的结果要低得多。多态信息含量 (PIC)是衡量片断多态性较好的指标。Botstein等 (1980)认为：当PIC>O．5时，该位点为高度多态位 点；当0．25 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文