【蓼子朴提取物对小菜蛾生物活性的初步研究】蓼子花

　　摘要：以小菜蛾为试虫，对蓼子朴（Ｉｎｕｌａ ｓａｌｓｏｌｏｉｄｅｓ Ｏｓｔｅｎｆ．）不同部位乙醇提取物进行杀虫活性比较，筛选出活性最高部位，然后采用不同溶剂对其进行萃取分离，得到不同溶剂萃取物，测试各萃取物对小菜蛾的触杀和拒食活性。结果表明，蓼子朴全草提取物活性最高，浓度为５０ ｇ／Ｌ时，对小菜蛾３龄幼虫７２ ｈ的触杀校正死亡率和２４ ｈ的非选择性拒食率分别可达９６．６７％和１００．００％；不同溶剂萃取物中，氯仿萃取物的活性最高，对小菜蛾３龄幼虫７２ ｈ的触杀校正死亡率和２４ ｈ的非选择性拒食率分别达到８０．００％和９６．４６％。
　　关键词：蓼子朴（Ｉｎｕｌａ ｓａｌｓｏｌｏｉｄｅｓ Ｏｓｔｅｎｆ．）；小菜蛾；杀虫活性
　　中图分类号：Ｓ４８２．３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）13－2655-03
　　
　　Preliminary Study on Bioactivity of Extracts from Inula salsoloides Ostenf. against Plutella xylostella
　　
　　ＺＨＡＯ Ｔａｎｇａ，ＬＩＮ Ｋｕｎｂ，ＹＡＮＧ Ｍｉｎ－ｌｉｂ
　　（ａ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ； ｂ．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｅｒｇｙ Ｓｏｕｒｃｅｓ ＆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
　　Ｎｉｎｇｘｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ ７５００２１， Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｉｎｕｌａ ｓａｌｓｏｌｏｉｄｅｓ Ｏｓｔｅｎｆ． ａｇａｉｎｓｔ Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ was compared；and the part with the highest insecticidal activity was screened out． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔ was used for extractive separation． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｆｏｒ ｃｏｎｔａｃｔ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ａｎｔｉｆｅｅｄａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ａｇａｉｎｓｔ ３ｒｄ ｉｎｓｔａｒ ｌａｒｖｅ ｏｆ Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｐｌａｎｔ ｏｆ Ｉｎｕｌａ ｓａｌｓｏｌｏｉｄｅｓ Ｏｓｔｅｎｆ． ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ５０ ｇ／Ｌ， ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｂｙ ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇ ｉｎ ７２ ｈ ａｎｄ ｎｏｎｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｆｅｅｄａｎｔ ｒａｔｅｓ ｉｎ ２４ ｈ ｒｅａｃｈｅｄ ９６．６７％ ａｎｄ １００．００％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｈａｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ． Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ７２ ｈ ａｎｄ ｎｏｎｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｆｅｅｄａｎｔ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈｉｎ ２４ ｈ ｗｅｒｅ ８０．００％ ａｎｄ ９６．４６％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｉｎｕｌａ ｓａｌｓｏｌｏｉｄｅｓ Ｏｓｔｅｎｆ．； Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ； insecticidal activity
　　
　　植物源农药以其高效、低毒、低残留、对环境安全友好而备受人们的关注，成为农药发展的一个方向，越来越受到广大农药研究者的青睐。从植物中提取、分离新的天然活性化合物是新农药创制开发的研究热点［１］。
　　蓼子朴（Ｉｎｕｌａ ｓａｌｓｏｌｏｉｄｅｓ Ｏｓｔｅｎｆ．）是菊科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）旋覆花属多年生草本植物，分布于宁夏、内蒙古、辽宁、河北、山西、陕西、甘肃、青海和新疆等省（区），花及全草都可入药。已有文献报道蓼子朴具有一定的抑菌杀虫活性，如李玉平等［２］报道蓼子朴对小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌、辣椒疫霉病菌、玉米大斑病菌具有很强的抑菌活性；屈秋耘等［３］报道蓼子朴对大皱鳃金龟、蒙古丽金龟、八字白眉天蛾有较高的毒杀效果；张宏利等［４］报道蓼子朴对粘虫有较好拒食和毒杀效果。
　　蓼子朴在宁夏盐池县被作为农田杂草处理［5］。研究其杀虫活性，可为蓼子朴的综合利用及无公害植物源农药的开发提供科学依据，开辟新的虫害防治途径，变废为宝。本研究以小菜蛾（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ Ｌ．）为试虫，对蓼子朴不同部位乙醇提取物及不同溶剂萃取物的触杀活性及拒食活性进行比较，筛选出活性较高的部位，为下一步提取分离其活性成分奠定基础，同时为更好地开发利用蓼子朴植物资源提供参考。
　　１材料和方法
　　１．１材料
　　１．１．１供试植物蓼子朴采自宁夏中宁县境内。采集全草，自然条件下阴干。将部分全草按照根、茎、叶、花分离归类。植物阴干后粉碎，过４０目筛（粒度为４２０ μｍ），低温保存备用。
　　１．１．２供试昆虫小菜蛾： 室内人工继代饲养（饲养环境：温度２３～２５ ℃，湿度６０％～７０％，每天光照１４ ｈ），试验时挑取健康均匀的３龄幼虫供试。
　　１．２方法
　　１．２．１不同部位提取物的制备［6］采用乙醇浸渍超声法：分别称取一定量蓼子朴全草、根、茎、叶、花的粉碎物，每克样品加８ mL体积分数为９５％的乙醇，室温浸泡２４ ｈ后超声提取４０ ｍｉｎ，过滤，滤渣再加溶剂浸提，重复提取３次，合并３次滤液。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩，蒸干溶剂，得乙醇提取物，称重后置于４ ℃冰箱中保存备用。根据下列公式计算出浸膏得率。
　　浸膏得率＝×100%
　　１．２．２不同溶剂萃取物的制备将蓼子朴乙醇提取物浸膏加１０倍体积的蒸馏水热溶，超声波助溶悬浮后，装入分液漏斗中，依次用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取３次。将各萃取液及剩余水相分别在旋转蒸发仪中减压浓缩至稠膏，并称重，记录各相萃取物质量。并按下列公式计算各相萃取物的得率。
　　萃取相浸膏得率＝×100%
　　１．２．３供试药液配制称取一定量浸膏，用５０％（体积分数，下同）丙酮溶液配成所需浓度的药液，置于４ ℃冰箱中保存备用。
　　１．２．４生物活性测定
　　１）触杀活性测定。采用浸渍法［7，8］：用圆形打孔器（直径１．５ ｃｍ）将新鲜甘蓝叶打成叶碟，十字交错放入培养皿（直径７ ｃｍ）中，将小菜蛾３龄幼虫放入圆桶状滤网中，浸于蓼子朴乙醇提取液中，１０ ｓ后迅速取出，用滤纸吸干多余药液，置于叶碟上，每处理１０头，重复６次。对照用５０％丙酮溶剂作相同处理。将培养皿置于人工气候箱中（温度为２４℃±１ ℃，相对湿度为６５％±５％，光照为１４ ｈ／ｄ，下同）观察，处理２４、４８、７２ ｈ后观察试虫的死亡情况，计算死亡率及校正死亡率。
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　　死亡率＝×100%
　　校正死亡率＝×100%
　　２）非选择性拒食活性测定。采用浸叶法［9］：用圆形打孔器（直径１．５ ｃｍ）将新鲜甘蓝叶打成叶碟，放入供试药液中浸渍５ ｓ（对照叶碟仅以５０％丙酮作相同处理），取出晾干放入培养皿中（内垫滤纸，用棉花球吸蒸馏水保湿）。每皿中放入４片相同处理叶碟，叶碟十字交错放置，每皿接入１０头饥饿６ ｈ的３龄小菜蛾，每组重复６次。将培养皿置于人工气候箱中观察，于２４、４８ ｈ后用坐标方格纸测定取食面积，计算拒食率。
　　非选择性拒食率＝
　　×100%
　　１．２．５数据处理用ＤＰＳ７．０５专业统计软件对试验数据进行系统分组分析，数据之间的差异用Ｄｕｎｃａｎ"s新复极差法进行比较。
　　２结果与分析
　　２．１蓼子朴不同部位乙醇提取物的杀虫活性比较
　　采取乙醇浸渍超声法分别对蓼子朴的花、叶、茎、根及全草进行提取，浸膏得率由高到低依次为：叶（２２．１８％）＞茎（１６．１１％）＞根（１５．１３％）＞花（１０．４３％）＞全草（１０．２２％）。
　　分别对小菜蛾３龄幼虫进行触杀和非选择性拒食活性测定，结果（表１、表２）表明，蓼子朴全草乙醇提取物对小菜蛾具有明显的触杀和拒食活性，在浓度为５０ ｇ／Ｌ时，７２ ｈ的触杀校正死亡率和２４ ｈ的非选择性拒食率分别为９６．６７％、１００．００％。
　　２．２蓼子朴不同溶剂萃取物对小菜蛾的杀虫活性比较
　　依次用不同极性溶剂对蓼子朴全草乙醇浸膏进行液－液分配萃取［8］分离，得不同溶剂萃取物。不同溶剂萃取物得率由高到低依次为：水萃取物（３８．８３％）＞石油醚萃取物（１４．７５％）＞氯仿萃取物（１４．２８％）＞正丁醇萃取物（１４．２１％）＞乙酸乙酯萃取物（４．３６％）。
　　分别测试各萃取物对小菜蛾的触杀活性和拒食活性，结果（表３、表４）表明，触杀活性由高到低依次为：氯仿萃取物＞石油醚萃取物＞乙酸乙酯萃取物＞水萃取物＞正丁醇萃取物；触杀活性随着处理时间的延长而逐渐增大。拒食活性由高到低依次为：氯仿萃取物＞乙酸乙酯萃取物＞石油醚萃取物＞正丁醇萃取物＞水萃取物，２４ ｈ的拒食效果高于４８ ｈ的拒食效果。氯仿萃取物的活性最高，当浓度为２５ ｇ／Ｌ时，处理７２ ｈ的触杀校正死亡率和２４ ｈ的非选择性拒食率分别为８０．００％和９６．４６％。
　　３结论与讨论
　　蓼子朴全草的乙醇提取物对小菜蛾３龄幼虫的活性最高，对小菜蛾具有显著的拒食和触杀活性。氯仿萃取物对小菜蛾的活性最好，表明蓼子朴氯仿萃取物中活性组分较多。触杀试验中，触杀活性随着处理时间的延长而逐渐增大。在非选择性拒食试验中，２４ ｈ的拒食效果高于４８ ｈ的拒食效果。
　　蓼子朴全草较其他各部位对小菜蛾的触杀和拒食活性高，这可能是蓼子朴各部位所产生的协同效果比其中任何单一部位的效果好，即各部位在一起所产生的增效作用。拒食活性随着处理时间的延长而呈减弱趋势，可能是蓼子朴中有拒食活性的成分易挥发，活性持续期短；也可能是长时间喂养下小菜蛾的感受器对该环境敏感性下降的缘故。本研究中出现了同一供试样品的触杀和拒食活性强弱不同的现象，可能与不同成分及不同作用方式对小菜蛾的作用机理不同有关，此问题有待进一步研究探讨。
　　
　　参考文献：
　　［１］ 刘国强，高锦明，吴文君． 植物源杀虫成分研究新进展［Ｊ］． 西北植物学报，２００２，２２（３）：７０３－７１３．
　　［２］ 李玉平，慕小倩，冯俊涛，等． 几种菊科植物杀菌活性的初步研究［Ｊ］． 西北农林科技大学学报（自然科学版），２００２，３０（１）：６８－７２．
　　［３］ 屈秋耘，栗一民． 榆林沙区的杀虫植物及其应用前景［Ｊ］． 陕西林业科技，１９８３（３）：８５－８９．
　　［４］ 张宏利，冯俊涛，陈安良，等． 秦岭山区２０４种植物对粘虫生物活性测定［Ｊ］． 西北林学院学报，２００４，１９（３）：９２－９４．
　　［5］ 左忠，王峰，温学飞，等．宁夏盐池县农田杂草种类及防治技术［Ｊ］．草业科学，２００４，２１（８）：７１－７６．
　　［6］ 赵春，李水清． 艾蒿提取物的生物活性研究［Ｊ］． 湖北农业科学，２００３（４）：４４－４６．
　　［7］ 薛超文，王海迎，孙强，等． 五种杀虫剂对小菜蛾的室内生物活性研究［Ｊ］． 农药研究与应用，２００６，１０（３）：２５－２８．
　　［8］ 左玲霞，杨敏丽，谢晓鹏． 野西瓜苗提取物对小菜蛾活性的作用方式［Ｊ］． 湖北农业科学，２００８，４７（１２）：１４５１－１４５３．
　　［9］ 李进步，方丽平，薛建平，等． 半夏乙醇提取物对小菜蛾幼虫生物活性的研究［Ｊ］． 中国农学通报，２００９，２５（５）：２２３－２２７．
　　
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