猪瘟高免血清 抗猪瘟一猪支原体肺炎二联自家高免血清的研制

　　摘要通过给待出栏肥猪多次免疫猪瘟及猪支原体肺炎疫苗，制备抗猪瘟-猪支原体肺炎二联高免血清。采用ELISA及HA/HI法进行特异性抗体的监测，猪瘟抗体OD值在免疫3次后达1.920～2.399，血凝效价为1∶2048～4096；猪支原体肺炎抗体S/P值在免疫4次后达0.861～1.311。使用疫苗作为免疫原制备高免血清简单、安全、有效，可用于猪瘟、猪支原体肺炎的防控。
　　关键词猪瘟；猪支原体肺炎；高免血清；研制
　　中图分类号S852.5文献标识码A文章编号 1007-5739（2011）0２-0333-01
　　
　　猪支原体肺炎（Mycoplasma pneumonia of swine，MPS）和猪瘟（Classical swine fever，CSF）是广泛存在的猪的2种传染病，目前均以隐性感染、长期带毒、药物治疗效果不明显为主要特征，使得治疗费用增加，饲料转化率降低，生长速度减慢，给养猪业带来较为严重的经济损失[1-4]。该研究选用相应的疫苗作为免疫原对健康商品猪进行多次免疫，成功制备抗猪瘟―猪支原体肺炎二联自家高免血清，现将结果报告如下。
　　1材料与方法
　　1.1试验动物
　　在武汉博牧生物技术有限公司实验猪场挑选70～80 kg健康肥猪6头，试验猪在断奶及8周龄进行过猪瘟常规免疫，在试验开展前必须确定受试猪不携带口蹄疫、蓝耳、2型圆环病毒、猪瘟、支原体等病原。
　　1.2疫苗及抗体检测试剂盒
　　试验所用50万倍高效价猪瘟活疫苗（细胞源）和猪支原体肺炎灭活疫苗（P株）分别为武汉中博生物股份有限公司及美国普泰克国际有限公司产品。猪瘟及猪肺炎支原体ELISA抗体检测试剂盒分别购自武汉科前动物生物制品有限责任公司和美国IDEXX生物科技股份有限公司。
　　1.3免疫程序
　　猪瘟疫苗按照5、20、80 mL剂量免疫3次，2次免疫之间间隔14 d；猪支原体肺炎的免疫在猪瘟免疫后7 d进行，按照5、20、80、200 mL剂量进行4次免疫，间隔14 d。注射方法均为多点肌肉注射。
　　1.4采血及抗体效价检测
　　每次免疫后7 d进行前腔静脉采血并分离血清，分别按照相应ELISA抗体检测试剂盒说明书操作，在630 nm处检测各孔的吸光值[5-6]。猪瘟抗体效价由吸光值直接判定，并且在三免后同时采用血凝抑制法测定血凝价进行对比；猪肺炎支原体效价需计算S/P值，S/P≤0.3为阴性，S/P>0.4为阳性，0.3≤S/P≤0.4为可疑，结果可按试剂盒提供的计算方法换算成终点抗体滴度：lg滴度=1.09（lgS/P）+3.36。
　　1.5屠宰及收集血清
　　在抗体效价达到要求时进行无菌放血。常规保定待宰猪，通过颈静脉插管收集全血，立即送往实验室进行血清的分离，加入适量硫柳汞及双抗后分装，-20 ℃保存。
　　1.6无菌检验
　　随机抽取制备的血清样品，接种于血液琼脂和含血清的TSA培养基，分别置于普通培养箱和CO2培养箱中37 ℃培养72 h，观察有无细菌生长。
　　1.7安全检验
　　挑选5头14~20日龄健康未免疫仔猪，按0.5 mL/kg・体重肌肉注射，观察7 d，观察仔猪有无异常反应。
　　2结果与分析
　　2.1血清抗体效价检测结果
　　2.1.1猪瘟抗体水平。试验猪在每次免疫后7 d采血，用ELISA法检测抗体水平，结果用OD值表示（表1）。同时，对相同的样品采用血凝抑制法测定血凝价为1∶204 8～409 6，达到高免血清要求。
　　
　　2.1.2猪支原体肺炎抗体水平。试验猪在每次免疫后7 d采血检测抗体水平，结果用OD及S/P值表示（表2）。二免后全部样品均呈阳性，四免后S/P值达0.861～1.311，可以作为高免血清使用。
　　2.2无菌检验结果
　　随机抽取的血清样品接种血液琼脂和含血清的TSA培养基后，在普通培养箱和CO2培养箱中37 ℃培养72 h，未见任何细菌生长，表明无菌检验合格。
　　2.3安全检验结果
　　用无菌检验合格的高免血清对5头14～20日龄健康未免疫仔猪按0.5 mL/kg・体重进行肌肉注射，连续观察7 d，未见异常反应，表明该血清安全。
　　3 结论与讨论
　　（1）该研究猪瘟抗体效价较支原体抗体效价升高快，推测其原因：一是试验猪在该研究实施前已进行了猪瘟的常规免疫（断奶及8周龄时各注射1头份），猪瘟的一免实际上是一次加强免疫，因而免疫后抗体效价上升迅速；二是该研究选用的疫苗类型不同，猪瘟疫苗为弱毒苗，而支原体疫苗为灭活苗，这也是造成两者抗体水平不同的原因之一。
　　（2）制备高免血清一般采用抗原性好的活毒作为免疫原，该方法对试验环境要求很高，否则存在散毒的危险；该研究选用商品疫苗按照设计的免疫程序进行多次强化免疫，血清抗体滴度逐步升高，猪瘟抗体OD值在三免后最高达2.399（血凝效价为1∶4 096），支原体肺炎抗体在四免后S/P值最高达1.311，并且操作较为简便，除了疫苗及监测的费用外，几乎不增加饲养成本，适合规模化养殖场自行制备，用于上述2种疾病的防控。
　　4参考文献
　　[1] 孙占伟，王义，郭茹，等.猪瘟高免苗源血清生产工艺与疗效观察[J].养猪，2003（1）：40-41
　　[2] 张险朋，潘杰，温清萍，等.猪瘟间接血凝试验与ELISA试验结果的相关性探讨[J].中国畜牧兽医，2007，34（6）：89-90.
　　[3] 秦先文，伍少钦，于博，等.接种猪肺炎支原体疫苗后抗体水平变化规律的研究[J].动物医学进展，2008，29（3）：36-39.
　　[4] 王华，张清，王君玮，等.猪支原体肺炎流行病学和诊断技术研究进展[J].动物医学进展，2009，30（9）：73-77.
　　[5] 郭铭生，陈云.猪瘟高免血清的研制和初步应用[J].黑龙江畜牧兽医，2010（5）：133-134.
　　[6] 曾秀，郑小波，谷山林，等.抗猪瘟高免血清的制备及应用[J].四川畜牧兽医，2000（6）：40.
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文