黄瓜新品种宁运3号的组织培养和快速繁殖|香根鸢尾组织培养与快速繁殖

　　摘要：以黄瓜新品种宁运３号的种子为材料，进行组织培养和快速繁殖研究，比较了不同时间ＨｇＣｌ２溶液浸泡对种子萌发的影响，不同浓度的６－ＢＡ、ＮＡＡ对不定芽及根诱导的影响。结果表明，用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２浸泡８ ｍｉｎ，种子的萌发率较高，污染率较低；在０．１～１．０ｍｇ／Ｌ范围内随６－ＢＡ浓度的提高，不定芽诱导率提高，ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ为较适宜的芽诱导培养基；１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ对生根诱导效果较好。
　　关键词：黄瓜；宁运３号；组织培养；快速繁殖
　　中图分类号：Ｓ６４２．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2563-03
　　
　　Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Cucumber Variety Ningyun No. 3
　　
　　ＬＩ Ｈｕｉ
　　（Ｈｕａｉ＇ａｎ Ｂｉｏ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｂｒａｎｃｈ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｔｅｄ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｈｕａｉ＇ａｎ ２２３２００，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｗ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｖａｒｉｅｔｙ Ｎｉｎｇｙｕｎ No. ３ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ， ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｍｍｅｒｓｉｎｇ ｔｉｍｅ ｉｎ ＨｇＣｌ２ ｏｎ ｓｅｅｄｓ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ， ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ６－ＢＡ， ＮＡＡ ｏｎ ｂｕｄ ａｎｄ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２ ｆｏｒ ８ ｍｉｎ， ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ； In 0.1~1.0 mg/L， the induction rate of adventitious buds increased by the increasing of 6-BA’s concentration； ＭＳ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃｒｏｗｄ ｂｕｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗａｓ １／２ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｕｃｕｍｂｅｒ； Ｎｉｎｇｙｕｎ Ｎｏ． ３； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
　　
　　黄瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）为葫芦科黄瓜属一年生蔓生植物，富含维生素Ａ、Ｃ以及多种有益矿物质，是我国的主要蔬菜作物之一，也是人们最喜食的蔬菜之一。近年来，随着人们生活水平的提高以及家庭小型化和旅游业的兴起，超市水果型黄瓜已被广大消费者接受，市场前景良好，经济效益可观，现已成为一项高效农业项目，水果型黄瓜繁殖与栽培研究工作在全国各地已经深入开展［１－６］。
　　宁运３号黄瓜是南京农业大学园艺学院育成的黄瓜新品种，瓜长１８～２２ ｃｍ，横径４．０～４．５ ｃｍ，瓜条顺直，整齐度好，表面光滑，耐贮耐运，且有较长的货架期，这些特点是传统品种难以达到的。另外，目前市场上水果型黄瓜品种主要为欧洲温室型，种子价格较高，一般农户很难承受。为加快新育水果型黄瓜资源推广工作进程，对宁运３号黄瓜进行组织培养与快繁技术研究实属必要。
　　１材料与方法
　　１．１材料
　　２００９年９月到２０１０年７月在南京农业大学园艺学院蔬菜种质资源重点实验室及江宁基地，以黄瓜新品种宁运３号为材料进行实验。
　　１．２方法
　　１．２．１无菌苗的获得选取子粒饱满、大小一致的黄瓜种子，清水浸泡２ ｈ后，用体积分数为７５％的酒精表面消毒 ３０ ｓ，放于０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液中分别消毒６、８、１０、１２ ｍｉｎ，然后用无菌水冲洗４～５次，无菌滤纸吸干表面水分，分散于灭菌后的湿润纱布上。２８ ℃暗培养１ ｄ，再置于２５ ℃条件下发芽，观察不同消毒时间对种子萌发的影响。
　　１．２．２不定芽诱导切取苗龄４ ｄ的带子叶顶芽为外植体，于子叶下面约０．５ ｃｍ的部位切下［３］，放入以下５种诱导培养基中：①ＭＳ＋６－ＢＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；② ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ；③ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ；④ ＭＳ＋６－ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ；⑤ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ。培养条件：光照１２ ｈ／ｄ，温度（２５±２）℃。２０ ｄ后观察统计不同浓度激素处理对不定芽诱导的影响。
　　１．２．３生根培养将高约１．０ ｃｍ左右的小芽切下，放入以下培养基中：①１／２ＭＳ；②１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；③１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ；④１／２ＭＳ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ。培养条件：光照１２ ｈ／ｄ，温度（２５±２）℃。２０ ｄ后观察统计试管苗生根情况。
　　２结果与分析
　　２．１不同消毒时间对种子萌发的影响
　　用７５％酒精进行种子表面消毒后，再用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液进行不同时间处理，观察其对种子萌发的影响（表１）。由表１可以看出，消毒时间与消毒效果存在着直接的关系，当消毒时间为６ ｍｉｎ时，种子的污染率最高，达到２６．７％，随着消毒时间的增加，污染率越来越低，但是对种子造成的毒害却越来越大，降低了种子的萌发率。因此，宁运３号黄瓜种子用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２消毒８ ｍｉｎ较好。在实验过程中观察到，消毒时间过长，对种子的毒害表现主要是子叶出现失绿现象，且不能正常伸展，胚根生长受抑制，下胚轴伸长较短或不伸长。
　　２．２６－ＢＡ浓度对不定芽诱导的影响
　　经过１周左右的培养，顶芽开始生长（图１），同时抽出２片新叶；２周后开始有不定芽从顶芽周围萌发，２１ ｄ分化出大量不定芽（图２）。从表２可以看出，６－ＢＡ浓度过低，不定芽诱导率较低，在一定范围内，随着６－ＢＡ浓度的升高，芽诱导率也越高，当６－ＢＡ浓度超过１．０ ｍｇ／Ｌ时，不定芽诱导率略有降低，同时，诱导的不定芽下端形成愈伤组织，并生根，茎叶玻璃化，叶皱缩，出现畸形。
　　２．３ＮＡＡ浓度对试管苗生根的影响
　　以１／２ＭＳ为基本培养基，添加不同浓度的ＮＡＡ诱导试管苗生根。７ ｄ后不定芽基部有白色的根长出，１４ ｄ后根伸长至３ ｃｍ左右，变粗壮，有侧根，２０ ｄ后小苗高度可达３～４ ｃｍ（图３），可以炼苗出瓶移栽（表３），其中NAA 0.5 mg/L对生根诱导效果好。
　　３结果与讨论
　　实验结果表明，宁运３号黄瓜种子表面消毒后用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液消毒８ ｍｉｎ，在无菌的湿润纱布上，无需添加额外的营养，在适宜的温度、水分条件下即可正常萌发。无菌苗在ＭＳ＋６-ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ培养基上不定芽诱导率最高，且芽健壮，分生力强。在前人的研究中，黄瓜生根诱导培养基中有的加入ＩＢＡ，有的加入ＩＡＡ，有的加入ＮＡＡ［１，４，５］，再生植株的生根时间长且有愈伤组织产生，这可能与自身基因型有关，也可能与添加的激素类型或浓度有关，具体原因还需进一步研究验证。本实验中，生根以１／２ ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ培养基效果最好，根多且粗壮，这与李建欣等［６］的研究一致。
　　参考文献：
　　［１］ 陈继峰． 黄瓜离体器官再生植株研究进展［Ｊ］．上海农业学报，２００７，２３（１）：１１４－１１８．
　　［２］ 侯爱菊，朱延明，杨爱馥，等． 诱导黄瓜直接器官发生主要影响因素的研究［Ｊ］． 园艺学报，２００３，３０（１）：１０１－１０３．
　　［３］ 杜胜利，魏惠军，魏爱民，等． 苗龄基因型和外植体类型对黄瓜离体器官发生的影响［Ｊ］． 天津农业科学，２０００，６（４）：１－４．
　　［４］ 梅茜，张兴国．黄瓜组织培养研究［Ｊ］．西南农业大学学报，２００２，２４（３）：２６６－２６７．
　　［５］ 万勇，张铮，刘红梅，等． 西瓜组织培养快速繁殖的初步研究［Ｊ］． 江西农业学报，２００２，１４（４）：４７－５０．
　　［６］ 李建欣，李建吾，葛桂民． 黄瓜子叶离体再生体系研究［Ｊ］． 长江蔬菜，２００８（１）：４４－４６．
　　注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
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