[菠萝蛋白酶提取] 果菠萝蛋白酶的提取失败原因

菠萝蛋白酶提取

一、实验目的：

1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺

2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取技术

二、实验原理：

菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。产品已被广泛应用于食品、医药等行业。结果表明。提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。 在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

三、实验步骤

操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml，

搅匀，静止5 min，最后再加0．5％EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 r／min离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。把洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％硫代硫酸钠溶液20 m1，搅匀，静止5 min；加1％L一半胱氨酸溶液10 ml，搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，最后得到蛋白酶糊。冷冻、干燥把提取的酶糊放入冰室中(一12℃)，低温冷冻15～20 h，取出解冻，离心得酶膏，把酶膏倒人装有氯化钙或五氧化二磷的干燥器中干燥6～10 h得干酶，研磨成粉状，低温保存。

四、实验装置流程、仪器设备及材料

实验用菠萝采自农贸市场，以7～9分成熟为标准。菠萝皮肉、茎各部分分别经打碎、榨汁、纱布粗滤、离心(4 000 r／min 10 rain)后得澄清液，存放于冰箱中备用。榨汁机JW一5、离心机LGl0—2．4A型、干燥器ZJYY—XMT一142、722光栅分光光度计。

五、实验结果数据记录和分析

1、pH=7、温度=60摄氏度

2、pH=7、单宁浓度2%

3、单宁浓度2%、温度六十摄氏度

六、实验数据处理