[“湘益”牌茯砖茶真菌的分离及鉴定研究] 湘益茯砖茶

　　摘要：采用平板梯度稀释法对金湘益特制礼品茯砖茶中真菌进行了分离纯化和计数，获得２３０１、２４０１、３３０２、４３０４、５４０２等５种类型真菌，其中５４０２为优势菌，每克茶样中含量达４．９8×１０６个，其余为非优势菌，数目相对较少。运用１８Ｓ ｒＤＮＡ片段序列进行同源比对，结合形态学鉴定方法对其进行鉴定，表明菌株２３０１为产紫青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、２４０１为产黄青霉（Ｐ. ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ）、３３０２ 为青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．）、４３０４ 为酱油曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ）、５４０２ 为蜡叶散囊菌（Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｉｏｒｕｍ）。
　　关键词：“湘益”牌茯砖茶；真菌分离；１８Ｓ ｒＤＮＡ同源比对；形态学特征；菌种鉴定
　　中图分类号：ＴＳ２７２．５＋４；Ｑ９４９．３２文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1765-05
　　
　　A Preliminary Research on Separation and Identification of the Fungi form
　　XIANG-YI Fuzhuan Tea
　　
　　ＬＩＵ Ｓｈｉ－ｑｕａｎ１，２，ＺＨＡＯ Ｙｕｎ－ｌｉｎ１，２，ＬＥＩ Ｃｕｎ－ｘｉ１，ＤＯＮＧ Ｍｅｎｇ１，ＰＥＮＧ Ｘｉａｏ－ｙｕｎ１，ＺＨＯＵ Ｘｉａｏ－ｍｅｉ１
　　（１． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｈｕｎａｎ Ｃｉｔｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｙａｎｇ ４１３０００， Ｈｕｎａｎ， Ｃｈｉｎａ；
　　２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８， Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｆｕｎｇｉ on ＸＩＡＮＧ－ＹＩ Ｆｕｚｈｕａｎ ｔｅａ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ １８Ｓ ｒＤＮＡ． Ｆｉｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ，２３０１， ２４０１， ３３０２， ４３０４ ａｎｄ ５４０２， ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Among those ５４０２ ｗａｓ ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ， as its density ｒｅａｃｈｅｄ ４．９8×１０６ ind/g ｏｆ ｄｒｉｅｄ ｔｅａ． ２３０１， ２４０１， ３３０２， ４３０４ ａｎｄ ５４０２ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ， Ｐ. ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ， Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．， Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ ａｎｄ Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｉｏｒｕｍ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＸＩＡＮＧ－ＹＩ Ｆｕｚｈｕａｎ ｔｅａ； ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｇｉ； ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ １８Ｓ ｒＤＮＡ； ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ； ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｇｉ
　　茯砖茶，是古老茶类黑茶中的高档品种，据《明史・茶法》记载，早在明嘉靖三年即公元１５２４年前，茯砖茶就被规定为运往西北供少数民族所需的官茶。茯砖茶与绿茶、红茶比较，绿茶属非发酵茶，红茶属半发酵茶，而茯砖茶属于完全发酵茶，其加工工艺独特，独具菌花香［１，２］。传统的特制茯砖茶已有５００年的生产历史；茯砖茶呈金黄色颗粒（俗称“金花”），经中外科学家分析鉴定，具有极强地分解油腻、消食、调节人体脂肪代谢的功能，特别适应于饮食结构中以奶肉类为主的人们饮用［３］。
　　湖南省益阳茶厂有限公司生产的“湘益”牌系列产品质量稳定可靠、品质优良，在国内同行业中处于领先地位。“湘益”牌系列茯砖茶是具有浓郁地方特色的黑茶种类之一，是选用优质茶叶为原料，经科学配方、精制加工而成。其外形整齐如砖片，内质金花普茂，菌香浓郁，开汤后汤色红浓、滋味醇厚、香气纯正，具有消食健胃的显著效果，深受新疆、青海、甘肃、西藏等省、自治区广大消费者的喜爱。为促进“湘益”牌系列茯砖茶发酵关键技术的突破，本研究选用金湘益（“湘益”牌系列产品之一）特制礼品茯砖茶就其微生物种类进行鉴定研究，以期为益阳黑茶发酵关键技术控制奠定坚实的基础。
　　１材料与方法
　　１．１材料与仪器
　　２００７年产金湘益特制礼品茯砖茶，采用平板梯度稀释法分离获得的真菌。
　　培养基：改良ＰＤＡ培养基（加１％茶汁）、查氏培养基、麦芽汁培养基、查氏酵母膏培养基、２０％蔗糖查氏培养基、４０％蔗糖麦芽汁培养基。
　　主要仪器：微型植物粉碎机、超净工作台、电热恒温培养箱、冰箱、数码显微镜、电子天平、高压灭菌锅等。
　　１．２方法
　　１．２．１真菌分离与计数用电子天平准确称取１．０００ ０ ｇ金湘益特制礼品茯砖茶１００目过筛粉碎样品，定容至１０ ｍＬ，配成１０－１、１０－２、１０－３、１０－４、１０－５各１０ ｍＬ，取１０－３、１０－４、１０－５等３个梯度各０．５ ｍＬ用改良ＰＤＡ培养基涂布平板，超净台上吹干，将平板置于２５℃培养７ ｄ，每个梯度重复３次，统计其出现真菌类型和数目，挑取不同类型的真菌单菌落于改良ＰＤＡ培养基平板划线分离纯化，斜面管４℃保存，用于分子鉴定和形态学鉴定。每克茶样真菌数目计算公式为：Ｎ＝（菌落数÷稀释倍数）×２０。
　　１．２．２分子鉴定采用１８Ｓ ｒＤＮＡ通用引物，用ＰＣＲ方法获得１８Ｓ ｒＤＮＡ片段后进行测序（由上海英骏生物技术有限公司完成），将得到的碱基序列通过因特网在ＧｅｎＢａｎｋ等国际核酸序列数据库内进行同源序列搜索，找出对应菌株与数据库中同源性最高的模式菌株或保藏于ＡＴＣＣ或ＤＳＭ等国际菌种保藏中心的菌株［４］。
　　１．２．３平板形态特征鉴定平板上菌落形态观察运用点植法，将接种针经火焰灭菌并待冷却后，从斜面上挑取少量菌体，接种于相应平板的中间位置，将平板置于２５ ℃培养７～１４ ｄ，观察菌落特征［５－７］。
　　１．２．４显微形态特征鉴定用解剖针从培养皿的菌落上挑取少量菌体，置载玻片的水滴中，加盖盖玻片，于显微镜下观察其形态特征［５－７］。
　　１．２．５菌株聚类分析运用Ｃｌｕｓｔａｌｗ软件对获得的菌株进行聚类分析。
　　２结果与分析
　　２．１真菌分离与计数
　　用改良ＰＤＡ培养基涂布平板２５ ℃培养７ ｄ，发现其出现真菌类型主要有５种，编号分别为２３０１、２４０１、３３０２、４３０４、５４０２（以这５个编号作为相应的菌株编号），对其进行计数统计，同时分别挑取这５种代表性菌落进行纯培养用于后续的分子和形态学鉴定试验。
　　由表１可知，５４０２型真菌为金湘益特制礼品茯砖茶的优势真菌，每克茶样中数目达４．９８×１０６个，２３０１、２４０１、３３０２、４３０４型真菌为非优势真菌，较５４０２相差较明显。由于２３０１、２４０１、３３０２、４３０４类型出现菌落数目较少，用平板梯度稀释法分离计数具有很大的误差，但这些类型的菌落存在数量是相当可观的，说明它们在黑茶发酵中的作用和地位是不容忽视的，因此，我们对其进行分子和形态学鉴定研究，以便进一步了解黑茶发酵中的微生物作用。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 　　２．２分子鉴定
　　获得１８Ｓ ｒＤＮＡ片段后进行测序，将得到的碱基序列通过因特网在ＧｅｎＢａｎｋ等国际核酸序列数据库内进行同源序列搜索，比对结果如下：
　　菌株２３０１与产紫青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）及疣孢青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃｕｌｏｓｕｍ）具有最高同源性，达９９．９％；菌株２４０１与光孢青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇｌａｂｒｕｍ）、产黄青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ）、爪哇正青霉（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｊａｖａｎｉｃｕｍ）及Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌｉｍｏｓｕｍ具有最高同源性，达９９．９％；菌株３３０２与Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｐａｓｃｕａ、 Ｓａｇｅｎｏｍｅｌｌａ ｑｒｉｓｅｏｖｉｒｉｄｉｓ、多变拟青霉（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ）、Ｂｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ ｚｏｌｌｏｒｎｉａｅ、黄丝衣霉（Ｂｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ ｆｕｌｖａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ及青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．）具有最高同源性，达９９．９％；菌株４３０４与黄曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、寄生曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ）及酱油曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ）具有最高同源性，达１００.0％；菌株５４０２与蜡叶散囊菌（Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｉｏｒｕｍ）、赤散囊菌（Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｒｕｂｒｕｍ）及灰绿曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ）具有最高同源性，达９９．８％。
　　２．３平板形态特征鉴定
　　菌株２３０１在查氏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径约１．３ ｃｍ，平坦有几道同心环纹，质地绒状，培养１２ ｄ，分生孢子结构大量产生，分生孢子面暗灰绿色，菌丝体橘黄色，反面橘红色，可溶性色素类似较淡的反面颜色且显著突出（图１）。在麦芽汁琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径约３．０ ｃｍ，平坦，有放射状短纹，质地绒状或兼有轻微絮状，分生孢子结构大量产生，分生孢子面暗蓝绿色，菌丝体淡黄色，反面红褐色（图１）。在查氏酵母膏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径约１．８ ｃｍ，平坦，中心有脐状突起而其他部位平坦，质地绒状，分生孢子结构大量产生，分生孢子面暗灰绿色，菌丝体淡黄色，反面暗红色（图１）。
　　菌株２４０１在查氏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径约２.0 ｃｍ，中间有脐状突起，有沟纹，质地呈显著的绒状，分生孢子面蓝绿色，菌丝体微黄色，反面黄褐色，可溶性色素显著，类似反面稍淡的颜色（图２）。在麦芽汁琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径３．５～４．５ ｃｍ，有少量放射状皱纹，质地绒状或兼有轻微絮状，分生孢子面带微灰蓝绿色，在中部面近淡灰橄榄色，反面带红褐色（图２）。在查氏酵母膏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径２．５～３．０ ｃｍ，质地绒状或兼有轻微絮状，分生孢子面微灰淡蓝绿色，菌丝体微黄色，反面黄褐色，可溶性色素淡黄色（图２）。
　　菌株３３０２在查氏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径２．５～３．０ ｃｍ，平坦，质地绒状兼轻微絮状，分生孢子结构较多，分生孢子面暗绿色，菌丝体粉色，反面杏黄色（图３）。在查氏酵母膏平板琼脂上菌落培养７ ｄ，直径２．０～３．０ ｃｍ，平坦，质地绒状兼絮状，分生孢子结构较多，分生孢子面灰绿色，反面橘黄色（图３）。在２０％蔗糖查氏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径１．５～３．０ ｃｍ，平坦，质地绒状兼絮状，分生孢子结构灰绿色，有白色菌丝环绕，反面浅绿色（图３）。
　　菌株４３０４在查氏琼脂上菌落培养７ ｄ，直径约３．５ ｃｍ，质地丝绒状，中部稍现絮状，具不明显的沟纹，颜色初为黄绿色，而后变深，菌落反面微褐色，老化后产黄绿色色素（图４）。在麦芽汁琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径约６．０ ｃｍ，质地丝绒状，絮状，暗草绿色，反面无色（图４）。在查氏酵母膏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径约５．０ ｃｍ，质地丝绒状，中部有气生菌丝，具辐射状的沟纹，颜色为草绿色，反面无色至粉红色（图４）。
　　菌株５４０２在查氏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径０．５～１．２ ｃｍ，平坦，分生孢子结构少，灰绿色，闭囊壳较多，黄色，反面棕褐色，产黑褐色色素（图５）。在２０％蔗糖查氏琼脂平板上菌落培养７ ｄ，直径约２．０ ｃｍ，平坦或具皱纹，黄褐色，分生孢子结构灰绿色，闭囊壳大量形成，有橙褐色菌丝环绕，反面棕黄色（图５）。在４０％蔗糖麦芽汁琼脂平板上菌落生长迅速，培养７ ｄ，直径约５．０ ｃｍ，气生菌丝明显，分生孢子结构较多，呈灰绿色，反面带橙褐色（图５）。
　　２．４显微形态鉴定
　　菌株２３０１：分生孢子梗茎（８０．０～２５０．０）μｍ×（２．５～３．２）μｍ，短平滑，顶端通常膨大；帚状枝双轮生，偶有三轮生或单轮生，彼此紧贴而近于平行；梗茎每轮４～８个，（９．０～１３．０）μｍ×（２．５~３．０）μｍ；瓶梗每轮４～６个，披针形，梗颈明显；分生孢子呈现椭圆形，充分成熟时部分呈现近球形，（２．８～３．５）μｍ×（２．２～３．０）μｍ，壁平滑（图６）。
　　菌株２４０１：帚状枝三轮生，少量双轮生，彼此稍叉开或叉开；副枝１～２个，（１２．０～２０．０）μｍ×（２．５～３．４）μｍ；梗基每轮２～５个，（１０．０～１３．０）μｍ×（２．５～３．０）μｍ；瓶梗每轮４～８个，（７．０～９．０）μｍ×（２．０～２．５）μｍ，瓶状；分生孢子呈现椭圆形或近球形，（３．０～３．５） μｍ×（２．５～３．０）μｍ，壁平滑（图６）。
　　菌株３３０２：帚状枝双轮生，偶有三轮生或单轮生，彼此通常稍叉开，也有紧贴近于平行者；梗基每轮５～９个，（９．０～１４．０）μｍ×（２．０～２．７）μｍ；瓶梗每轮４～８个，（８．０～１２．０）μｍ×（１．０～２．５）μｍ，披针形，梗颈短；分生孢子呈现球形或近球形，２．５～３．５ μｍ，呈小疣状粗糙（图６）。
　　菌株４３０４：分生孢子幼时为球形，后成辐射形，分生孢子梗茎（１４０．０～７００．０）μｍ×（４．８～１１．０）μｍ，壁近于光滑或有时在顶囊处现粗糙，顶囊近球形，小者棒形，１３～４１ μｍ，产孢结构单层，分生孢子球形或近球形，４．２～６．０ μｍ，具粗疏小刺（图６）。
　　菌株５４０２：闭囊壳球形或近球形，１２～１６ μｍ，子囊孢子双凸镜形，（６～８）μｍ×（４～６）μｍ，“赤道”部分具明显但较浅的沟，两侧有脊，凸面光滑（图６）。
　　２．５聚类结果分析
　　对获得的５株菌株的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列进行聚类分析，结果表明它们与优势菌的种间有一定差异（图７）。
　　３结论与讨论
　　结合１８Ｓ ｒＤＮＡ片段的序列和形态学鉴定结果，经广东省微生物分析检测中心鉴定（粤微检（２００９）ＺＤ０３９８号）确认：
　　菌株２３０１的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列与Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ同源性高达９９．９％，其形态特征与Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ最相似。菌株２４０１的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列与Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ同源性高达９９．９％，其形态特征与Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ最相似。菌株３３０２的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列与Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．同源性高达９９．９％，其形态特征与Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．最相似。菌株４３０４的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列与Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ同源性高达１００.0％；其形态特征与Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ最相似。菌株５４０２的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列与Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｉｏｒｕｍ同源性高达９９．８％，其形态特征与Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｉｏｒｕｍ最相似。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 　　本研究采用改良ＰＤＡ培养基，对２００７年产金湘益特制礼品茯砖茶，采用平板梯度稀释法分离获得的真菌２３０１、２４０１、３３０２、４３０４、５４０２，运用分子和形态学鉴定相结合的方法对其进行了种的鉴定。
　　首先，从中分离的优势菌经我们鉴定为蜡叶散囊菌，与传统认为的冠突散囊菌（Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｃｒｉｓｔａｔｕｍ）［１，２］有差异，可能是由于我们对优势菌的挑取只是随机选择一个单菌落，而蜡叶散囊菌和冠突散囊菌属于相近的真菌种，Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｃｒｉｓｔａｔｕｍ １８Ｓ ｒＤＮＡ登录号ＡＢ００２０７３．１，与Ｅｕｒｏｔｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｉｏｒｕｍ １８Ｓ ｒＤＮＡ相似度为９９％，我们重复了培养结果，与湖南农业大学分离的冠突散囊菌生长比较，在ＰＤＡ培养基上生长的菌落形态特征基本上不能区分，故有可能存在较大的误差。当然，也有可能是不同茯砖茶种类中，其优势菌本身就存在差异，是散囊菌的生理小种或变异种，这有待进一步的研究。由于不同茯砖茶种类中优势菌存在差异，说明很有必要对不同茯砖茶种类进行比较研究，建立黑茶优势菌种质资源库，以期更好地提升黑茶品质，发挥黑茶应有的作用。
　　另外，我们用平板梯度稀释法也分离到了２３０１、２４０１、３３０２、４３０４等非优势菌，它们分别属于不同的青霉属和曲霉属，对其１８Ｓ ｒＤＮＡ序列进行聚类分析，也表明它们与优势菌的种间有一定差异。尽管我们在挑取单菌落进行分离纯化存在偶然性，但它们在黑茶发酵中是普遍存在的，因为我们３次重复都能找到类似特征菌落。这从另外一方面也说明了黑茶发酵中微生物是一个多菌株种类、协同作用的结果，有必要从微生物生态系统角度对黑茶深入进行，通过对黑茶发酵环境微生物群落的种群结构和多样性进行深入探查并研究其动态变化，可以为优化黑茶发酵群落结构、调节群落功能和发现新的重要微生物功能类群提供可靠的依据。
　　参考文献：
　　［１］ 金冬双，龚淑英． 黑茶的微生物作用研究进展［Ｊ］． 茶叶，２００７，３３（４）：２０３－２０７．
　　［２］ 杨抚林，邓放明，赵玲艳，等． 黑茶微生物学研究进展［Ｊ］． 微生物学杂志，２００６，２６（１）： ８１－８４．
　　［３］ 黄群，陈林杰，李彦坡，等． 冠突散囊菌黑茶发酵液对消化酶活性影响的研究［Ｊ］． 微生物学通报，２００７，３４（５）：９１７－９２０．
　　［４］ 萨姆布鲁克 Ｊ．分子克隆实验指南［Ｍ］． 黄培堂，译． 第三版． 北京：科学出版社，２００５．
　　［５］ 孔华忠． 中国真菌志 第三十五卷 青霉及其相关有性型属［Ｍ］． 北京：科学出版社，２００７．
　　［６］ 齐祖同． 中国真菌志 第五卷 曲霉及其相关有性型属［Ｍ］． 北京：科学出版社，１９９７．
　　［７］ 戴芳澜． 真菌的形态和分类［Ｍ］． 北京：科学出版社，１９８７．
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文