【枯草芽孢杆菌X-4对土壤青枯菌消长变化及防病效果的影响】 土壤中硫X荧光法

　　摘要：为研究枯草芽孢杆菌Ｘ－４在土壤中的定殖动态对青枯菌消长变化的影响，以及对番茄青枯病的防治效果，采用绿色荧光蛋白基因标记法，通过番茄盆栽试验直接测定了其在土壤中的定殖效果及对青枯病病原菌数量、土壤微生物功能多样性及生物量的影响。结果表明，通过绿色荧光蛋白基因标记法能成功跟踪菌株Ｘ－４在土壤中的定殖状况，其定殖曲线表现为一非对称抛物线，前期缓慢上升，２４ ｄ达到高峰，当接种量为５．０×１０５、１．０×１０６ＣＦＵ／（ｇ土）时，其定殖峰值分别为２．９８×１０７ＣＦＵ／（ｇ土）和５．０３×１０７ＣＦＵ／（ｇ土），而青枯菌数量则呈现出与Ｘ－４相应的消长变化，处理土壤青枯菌数量在１２～30 ｄ时段内呈现下降的趋势，而对照病菌数量处于较高水平并且还有上升趋势，因此未接种菌株Ｘ－４处理发病早，病指高；接种微生物菌剂Ｘ－４对土壤微生物功能多样性无不利影响，并能有效地抑制病菌，对番茄青枯病表现出明显的防治效果，接种量为１．０×１０６ＣＦＵ／（ｇ土）时，３５、４５、５５ ｄ对青枯病的防效分别为１００％、８３．３％和５７．２％；接种Ｘ－４还能促进番茄植株生长，增加生物量，促进结果。绿色荧光蛋白标记法可为枯草芽孢杆菌Ｘ－４在土壤中的动态变化提供直接的菌量数据，其数量与土壤中青枯菌数量的消长动态对番茄青枯病的防治效果有重要影响。
　　关键词：枯草芽孢杆菌Ｘ－４；定殖；消长动态；番茄青枯病；防病效果
　　中图分类号：Ｑ９３９．９６文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2425-03
　　
　　Effect of Inoculating Bacillus subtilis X-4 on Ralstonia solanacearum in Soil and Controlling Tomato Bacterial Wilt
　　
　　ＸＩＡＯ Ｘｉａｎｇ－ｚｈｅｎｇ１，ＬＩＵ Ｋｅ－ｘｉｎｇ２，ＬＩＡＯ Ｚｏｎｇ－ｗｅｎ２，ＤＵ Ｊｉａｎ－ｊｕｎ１
　　（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｚｈｏｎｇｋａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０２２５， Ｃｈｉｎａ；
　　２． Ｎｅｗ Ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４２， Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｘ－４ ｏｎ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｉｎ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ tomato bacterial wilt ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ （ｇｆｐ） ｍａｒｋｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｘ－４ ｉｎ ｓｏｉｌ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｔｒａｃｋｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｂｙ ｇｆｐ ｍａｒｋｉｎｇ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｎ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｐａｒａｂｏｌａ， ａｓ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｌｏｗｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｐｈａｓｅ ａｎｄ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｐｏｉｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ２４ｔｈ ｄａｙ． Ｔｈｅ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅｓ ｗｅｒｅ ２．９８×１０７ CFU/ｇ ａｎｄ ５．０３×１０７ CFU/ｇ ｄｒｙ ｓｏｉｌｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ when ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ Ｘ－４ ａｔ ｔｈｅ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ５．０×１０５ ａｎｄ １．０×１０６ CFU/ｇ ｆｒｅｓｈ ｓｏｉｌ. Mｅａｎｗｈｉｌｅ， ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｓｈｏｗｅｄ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｄｙｎａｍｉｃｓ． Ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｓｏｉｌ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｒｅｎｄ ａｔ ｌｏｗｅｒ ｌｅｖｅｌ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ Ｘ－４ ｆｒｏｍ １２ｔｈ ｔｏ 30ｔｈ ｄａｙ； but it ｋｅｐｔ ｏｎ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｒｅｎｄ in the control soil； ａｎｄ ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ ａｐｐｅａｒｅｄ ｅａｒｌｉｅｒ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｓｅｒｉｏｕｓ． Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ Ｘ－４ ｈａｄ ｎｏ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｂ，ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ． Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ ｄｏｓａｇｅ ｗａｓ １．０×１０６ CFU/ｇ ｆｒｅｓｈ ｓｏｉｌ， ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ－ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ the ３５ｔｈ， ４５ｔｈ ａｎｄ ５５ｔｈ ｄａｙ ｗａｓ １００％， ８３．３％ ａｎｄ ５７．２％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ， ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ Ｘ－４ ｃｏｕｌｄ ａｌｓｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｏｍａｔｏ ｇｒｏｗｔｈ， ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｆｒｕｉｔ ｎｕｍｂｅｒｓ． Ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｄａｔａ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｘ－４ ｉｎ ｓｏｉｌ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｇｆｐ ｍａｒｋｉｎｇ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｍｏｕｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｉｎ ｓｏｉｌ ｈａｄ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｘ－４； ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ； ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃ； ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ； ｄｉｓｅａｓｅ－ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ
　　
　　微生物接种剂又称生物肥料，是一类含有活体微生物，当应用于作物或土壤时，能够在作物根际或体内定殖，并起到特定肥料效应的微生物制品［１］。目前，微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用，保护环境，以及提高农作物产品品质和食品安全等方面表现出了不可替代的作用［２－４］。许多关于施用生物有机肥或生物菌剂防病的文献多集中于研究防病效果和对土壤微生物多样性调控指标等方面［５－７］。目前尚未有对防病菌株与病菌动态消长的研究，虽有一些通过对多样性指数变化和防效对有益菌和病菌消长的分析和推测，但未有关于有益菌和病菌消长动态的直接证据。为此，研究采用绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐ）对拮抗菌株Ｘ－４进行了标记，研究其接种后在土壤中的动态变化规律，同时研究了对应土壤中番茄青枯病病原菌数量变化，以期为菌株Ｘ－４防病效果提供直接的研究数据，为今后的机理研究和推广应用提供科学根据；同时通过研究枯草芽孢杆菌Ｘ－４在土壤中的定殖规律，揭示其与青枯病病原菌的动态变化及防病效果之间的关系，为指导该菌在施肥防病中的应用提供科学依据。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 　　１材料与方法
　　１．１试验材料
　　１．１．１枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｘ－４华南农业大学新肥料资源研究中心分离并保存，对青枯病病原菌具有拮抗作用。试验所用菌株用含绿色荧光蛋白基因的载体ｐＧＦＰ４４１２标记，标记菌株携带ｇｆｐ和耐受浓度为１００ μｇ／ｍＬ氨苄青霉素的抗性基因。标记菌株接种液含菌量≥２．０×１０８ＣＦＵ／ｍＬ。
　　１．１．２青枯病病原菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）自华南农业大学试验农场发病番茄植株分离，具有致病活性。接种液含菌量≥５．０×１０８ＣＦＵ／ｍＬ。
　　１．１．３试验作物番茄品种为益丰４号，为青枯病易感品种，从广州市蔬菜研究所购入。
　　１．２方法
　　１．２．１试验设计试验为番茄盆栽，采用聚乙烯塑料盆，每盆装土５ ｋｇ，试验用土取自华南农业大学农场菜园土，系茄科作物连作土壤，为青枯病易发地，土壤基本养分状况见表１。试验共设３个处理：①ＣＫ．接种无菌水；②Ｔ１．接种Ｘ－４，５．０×１０５ＣＦＵ／（ｇ土）；③Ｔ２．接种Ｘ－４，１．０×１０６ＣＦＵ／（ｇ土），每处理６次重复，随机排列。所有处理移苗时均接种青枯菌１．０×１０５ＣＦＵ／（ｇ土）。接种剂Ｘ－４和青枯菌根据发酵培养液含菌情况用无菌水稀释到所需量，均匀浇到移栽穴中，与土充分混匀。试验过程中各处理氮、磷、钾施入量相等，即Ｎ １２０ ｍｇ／（ｋｇ土），Ｐ２Ｏ５ ８０ ｍｇ／（ｋｇ土），Ｋ２Ｏ １００ ｍｇ／（ｋｇ土），８０％肥料作基肥施用，２０％肥料待番茄移栽２０ ｄ后作追肥施用。番茄种子育苗前先用２％次氯酸钠消毒２ ｍｉｎ，然后用无菌水反复冲洗，播种在小塑料盒中（盒中土壤由栽培基质和细肥土按１∶１比例混合而成），出苗２０ ｄ后移至栽种盆中，每盆两株。
　　１．２．２土壤中Ｘ－４及青枯菌数量测定
　　１）枯草芽孢杆菌Ｘ－４。采用含１００ μｇ／ｍＬ氨苄青霉素的ＰＤＡ培养基，并结合荧光显微镜观察计数。
　　２）青枯菌。采用ＴＴＣ培养基［８］＋０．１％放线菌酮＋０．２％硫酸新霉素的方法测定。
　　１．２．３番茄青枯病防治效果测定番茄移栽后，每天观察植株发病情况。发病率及病情指数调查参照方中达《植病研究方法》的相关内容［９］。番茄青枯病按发病严重程度分为５级，０级为叶片无症状；１级为植株１／４以下的叶片表现萎蔫症状；２级为植株１／４~１／２叶片表现萎蔫症状；３级为植株１／２以上叶片表现萎蔫症状；４级为全株萎蔫死亡。病情指数＝［∑（病级株数×代表数值）／（株数总和×发病最重级的代表数值）］×１００。防病效果（％）＝［（对照病情指数－处理病情指数）／对照病情指数］×１００。
　　１．２．４番茄生物量指标的测定番茄株高采用卷尺测量从茎基部至最顶端的长度；植株鲜重采用直接称量法；干重采用烘干法，先１０５℃杀青０．５ｈ，然后６５℃烘干至恒重。
　　１．２．５土壤微生物功能多样性分析采用ＢＩＯＬＯＧ －ＥＣＯ微平板研究接种微生物菌剂Ｘ－４对土壤微生物多样性的影响。分别取移栽０、６、１２、１８、２４、３０、３６ ｄ的番茄盆栽土壤进行分析，具体方法参照文献［１０］。ＡＷＣＤ（Ａｖｅｒａｇｅ ｗｅｌｌ ｃｏｌｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）计算方法如下：ＡＷＣＤ＝［∑（Ｃ－Ｒ）］／３１，其中Ｃ指各反应孔在５９０ｎｍ下测定的吸光值（ＯＤ５９０nm），Ｒ是对照孔的吸光值。
　　１．２．６数据分析数据采用ＳＡＳ ９．０进行统计分析。
　　２结果与分析
　　２．１菌株Ｘ－４在土壤中的定殖动态
　　接种微生物菌剂后，分别于不同时间测定盆栽土壤中Ｘ－４的数量（图１）。从图１可以看出，不同接种水平时土壤中Ｘ－４基本呈现相似的变化规律，表现为先升后降，１２ ｄ时达到比较高的定殖水平，数量为１．６９×１０７～１．９０×１０７ＣＦＵ／（ｇ土），并且一直维持比较高的定殖水平至２７ ｄ左右，菌株Ｘ－４在土壤中的定殖高峰可维持１０～１５ ｄ。
　　２．２接种Ｘ－４对土壤中青枯菌数量的影响
　　分别在接种Ｘ－４后０、６、１２、１８、２４、３０、３６ ｄ测定土壤中的青枯菌数量（图２）。从图２可以看到，青枯菌数量在接种后的几天时间里有短暂的增加，这与番茄苗移栽后引起根际分泌物增加和接种菌剂中含有一定的营养物质有关，但随后很快下降。对照土壤中青枯菌数量基本维持在一个比较稳定的水平，而Ｘ－４处理的土壤病菌数量则呈现下降趋势，到３０ ｄ时降到最低水平，T1、T2处理分别比对照降低８１．１％和９０．１％，至３６ ｄ后青枯菌数量略有回升，这与此时土壤中拮抗菌数量下降、抑制力减弱有关。从图２还可看出，接种量大的处理Ｔ２青枯菌数量下降趋势更明显，方差分析结果表明，自第１２天起，接种Ｘ－４的处理其青枯菌数量与对照相比差异均达显著水平，接种拮抗菌能有效降低盆栽土壤中病原菌数量。
　　２．３接种Ｘ－４对番茄青枯病的防治效果
　　从番茄栽培开始至５５ ｄ后收获，连续调查其发病率和病情指数，分别统计了３５、４５、５５ ｄ的相关数据（表２），从表２中结果可以看到，３５ ｄ时接种清水的处理已经有青枯病发生，而接种拮抗菌Ｘ－４的处理其发生青枯病时间要晚于对照；从调查结果看，接种Ｘ－４的抑病效果呈降低趋势，到５５ ｄ时Ｔ１和Ｔ２的抑病效果分别为３０．６％和５７．２％；从病情指数看，与对照相比，接种Ｘ－４的处理４５、５５ ｄ时均达到显著水平。从表２结果还可看到， 加大接种量有利于提高防病效果，Ｔ２在４５ ｄ和５５ ｄ的防效分别为８３．３％和５７．２％，明显高于Ｔ１，可以得出，接种量是影响防病效果的因素之一。结合图１结果，接种２４ ｄ枯草芽孢杆菌Ｘ－４定殖达到高峰，说明此阶段是抑病力最强点，随着时间的延长，抑病效果会随Ｘ－４数量减少而逐渐减弱，接种４５ ｄ的防病效果要好于５５ ｄ就证明了这一点。
　　２．４接种Ｘ－４对番茄生物量的影响
　　番茄栽培５５ ｄ后收获，分别调查其株高、鲜重、干重等生物量指标。结果发现，接种枯草芽孢杆菌Ｘ－４可以促进植株生长，表现为株高、单株鲜重、总鲜重增加，同时单株干重也有一定程度的增加，总干重增加较多，Ｔ１、Ｔ２分别增加１６．００％和１１．５５％。此外，接种拮抗菌Ｘ－４还能促进结果，接种处理其单株结果数量均高于对照，每株分别多１．９和１．５个。试验结果表明，菌株Ｘ－４不仅具有对病菌的抑制作用，而且还具有较好的促生效果，其防效明显与抑菌及促生效果有关。
　　２．５接种Ｘ－４对土壤微生物功能多样性的影响
　　图３显示，接种微生物菌剂Ｘ－４后不同处理的土壤ＡＷＣＤ除在１２ ｄ比对照有明显的提升和２４ ｄ时Ｔ２亦高于对照外，其余时段ＣＫ与Ｔ１、Ｔ２差异不大，基本呈现相似的变化规律，即先下降、18 d左右时（T2）、２４ ｄ左右时（CK、T1）又开始回升，说明接种Ｘ－４对土壤微生物多样性无不利影响。至于试验中不同时间的ＡＷＣＤ表现出先降后升的变化规律，可能与当时试验的环境条件变化有关系，试验过程中经历了一个低温期，而低温影响土壤微生物的代谢活性，导致ＡＷＣＤ下降，研究表明，在一定范围内土壤湿度、温度等是影响土壤微生物活性和多样性的重要因素［１１，１２］。
　　３讨论
　　研究微生物在土壤及作物体内的定殖是揭示其发挥促生或抗病作用的基础，以前曾有过许多相关研究［１３－１５］，这些文献重点研究了引入微生物在作物根际和体内的定殖效果和规律、影响定殖的因素以及对植物病害的防效等方面，而研究接种拮抗菌与致病菌在土壤中的动态变化关系方面鲜有报道。研究通过ｇｆｐ标记方法跟踪了枯草芽孢杆菌Ｘ－４在土壤中的动态变化，并测定了病菌数量相应变化数据，显示了两者此消彼长的密切联系及对番茄青枯病的影响，研究结果表明，接种Ｘ－４与病菌数量、病情指数间确实有内在联系。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 　　３．１菌株Ｘ－４与病菌的消长关系对青枯病的影响
　　研究结果显示，在番茄生长期中枯草芽孢杆菌Ｘ－４的定殖曲线为一非对称抛物线，前期缓慢升高，２４ ｄ达到高峰后急剧下降，且降幅很大，６ ｄ后跌至低点，中期以２４ ｄ为最高点，由于下降快，下降后维持在较高水平的时间估计为３ ｄ，故中期菌量高峰维持时间为１２～２７ ｄ左右，菌株Ｘ－４的这一动态变化与病菌呈现明显的此消彼长关系。由于受到高量Ｘ－４的压制，Ｔ１、Ｔ２处理土壤青枯菌数量在１２～30 ｄ时段内处于低水平且呈现下降的趋势，而ＣＫ由于没有Ｘ－４的压制作用，病菌数量处于高水平并且还有上升趋势。这期间高数量病菌开始侵染番茄植株，３５ ｄ开始表现发病症状，而Ｔ１、Ｔ２处理由于病菌数量低，尚无发病，直至４５ ｄ时才表现出较轻的发病症状。这表明Ｘ－４与病菌的强弱消长对番茄青枯病发生有密切关系，通过施肥调控拮抗菌Ｘ－４与病菌的消长对青枯病防治有重要影响。
　　３．２菌株Ｘ－４动态曲线与施肥防病技术策略
　　土壤中枯草芽孢杆菌Ｘ－４与青枯菌的动态变化显示二者存在密切的消长关系，并影响青枯病发生的迟早与轻重。拮抗菌Ｘ－４定殖高峰维持的时间长有利于防病。菌株Ｘ－４的动态变化曲线对于如何制定施肥防病的技术策略有重要参考价值。Ｔ１、Ｔ２处理Ｘ－４数量在达到高峰后迅速下降，对病菌的抑制随之减弱，因而３０ ｄ后病菌数量回升，番茄感染后于４５ ｄ时表现出症状。如果能够在番茄生长期将Ｘ－４数量维持在较高水平和较长时期，从而保持对病菌的有效抑制力，将有助于进一步推迟发病及减轻病情指数，甚至不发病。试验中Ｔ１、Ｔ２处理拮抗菌Ｘ－４与病菌消长变化关系对施用策略很有启发，研究显示，Ｔ１、Ｔ２处理中Ｘ－４的变化曲线大致一样，接种量高的处理Ｔ２峰值虽然高于Ｔ１，但同样急剧下降，在６ ｄ内降至低点，与Ｔ１一样，这说明大幅增加菌剂用量，对延长其高峰期或减缓其衰减幅度作用甚少，宜分次施肥。试验表明，拮抗菌Ｘ－４缓慢上升期为１２ ｄ，经过１２ ｄ后才能上升到高峰值，因此需要在Ｘ－４菌量下降至低水平（临界水平）前１２ ｄ左右再次施用，可维持长时间的定殖高峰，如在２０ ｄ左右施第二次，则有可能在３０ ｄ时形成第二个抛物线增殖峰，而保持对病菌的有效压制，这样更有利于防病。谭兆赞等［１６］研究也表明采用分两次接种处理的堆肥比一次接种防病效果好。
　　３．３菌株Ｘ－４防病效果的综合分析
　　菌株Ｘ－４的防病效果除了对青枯菌的压制作用外，还与其促生作用有关。试验表明，接种Ｘ－４对番茄有一定的促进生长效果，其株高、鲜重、干重等生物量指标均优于对照，Ｘ－４定殖的防病效果是抑制病菌与促生长两方面作用的总和。提高土壤微生物多样性有利于防治番茄青枯病［１６］，平均每孔颜色变化值（ＡＷＣＤ）是反映土壤中微生物功能多样性的一个重要指标［１７］，其大小与微生物功能多样性密切相关，ＡＷＣＤ高有利于维持土壤微生物多样性水平因而有利于防病。试验表明，Ｘ－４定殖对土壤微生物ＡＷＣＤ没有不利影响，而且在某一时段还略有提升。因此，从抑制病菌、促进番茄生长和土壤微生物多样性方面来分析，菌株Ｘ－４都有作用，其防病效果是这几个因素的综合反映。
　　参考文献：
　　［１］ ＶＥＳＳＥＹ Ｊ Ｋ． Ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉａ ａｓ ｂｉｏ－ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒｓ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｓｏｉｌ， ２００３，２５５：５７１－５８６．
　　［２］ 李俊，沈德龙，姜昕． 我国微生物肥料行业的现状与发展对策［Ｊ］． 农业质量与标准， ２００３（３）：２７－２９．
　　［３］ 夏光利，毕军，张萍，等． 新型生物有机肥（ＮＡＥＦ）对番茄生长及土壤活性质量效应研究［Ｊ］． 土壤通报，２００７，３８（３）：５１９－５２２．
　　［４］ 谭兆赞，林捷，刘可星，等． 复合微生物菌剂对番茄青枯病和土壤微生物多样性的影响［Ｊ］．华南农业大学学报，２００７，２８（１）：４５－４９．
　　［５］ 蔡燕飞，廖宗文，章家恩，等． 生态有机肥对番茄青枯病及土壤微生物多样性的影响［Ｊ］．应用生态学报，２００３，１４（３）：３４９－３５３．
　　［６］ ＦＬＩＥＢＢＡＣＨＡ Ａ， ＥＹＨＯＲＮ Ｆ， ＭＡＤＥＲ Ｐ． “ＤＯＫ” ｌｏｎｇ-ｔｅｒｍ ｆａｒｍｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｔｒｉａｌ： ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｂｉｏｍａｓｓ， ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ［Ａ］． ＲＥＥＳ Ｒ Ｍ， ＣＡＭＰＥＬＬ Ｂ Ｃ． Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｍａｔｔｅｒ［Ｃ］． Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ： ＣＡＢＩ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， ２００１．３６３－３６９．
　　［７］ 郭坚华，龚龙英，祈红英，等． 三个拮抗菌株对辣椒青枯病的作用机制［Ｊ］． 中国生物防治， ２００３，１９（１）：６－１０．
　　［８］ ＫＥＬＭＡＮ Ａ． Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｔｏ ｃｏｌｏｎｙ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｎ ａ ｔｅｒｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｍｅｄｉｕｍ［Ｊ］． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９５４，６４：２９３－２９５．
　　［９］ 方中达． 植病研究方法［Ｍ］．第三版．北京： 中国农业出版社，１９９８．
　　［１０］ 姚槐应，黄昌勇． 土壤微生物生态学及其实验技术［Ｍ］． 北京：科学出版社，２００６．
　　［１１］ 肖辉林，郑习健． 土壤变暖对土壤微生物活性的影响［Ｊ］． 土壤与环境，２００１，１０（２）：１３８－１４２．
　　［１２］ ＳＣＨＵＴＴＥＲ Ｍ Ｅ， ＳＡＮＤＥＮＯ Ｊ Ｍ， ＤＩＣＫ Ｒ Ｐ． Ｓｅａｓｏｎａｌ， ｓｏｉｌ ｔｙｐｅ ａｎｄ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｏｆ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｃｒｏｐｐｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］． Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｉｌｓ，２００１，３４：３９７－４１０．
　　［１３］ 杨合同，陈凯，李纪顺，等． 重组巨大芽孢杆菌在小麦根际的定殖及对植物真菌病害的防治效果［Ｊ］．山东科学，２００３，１６（３）：１２－１７．
　　［１４］ ＨＥＩＪＮＥＮ Ｃ Ｅ． Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎｔｏ ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ ａｍｅｎｄｅｄ ｓｏｉｌ［Ｄ］． Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ， tｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ： Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， １９９２．
　　［１５］ ＫING Ｅ Ｂ， ＰARKE Ｊ Ｌ． Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏ－ｃｏｎｔｒｏｌ ａｇｅｎｔ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ ＡＭＭＤＲＩ ｏｎ ｆｏｕｒ ｐｅａ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ［Ｊ］． Ｓｏｉｌ Ｂｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， １９９６， ２８： ３０７－３１２．
　　［１６］ 谭兆赞，徐广美，刘可星，等． 不同堆肥对番茄青枯病的防病效果及土壤微生物群落功能多样性的影响［Ｊ］． 华南农业大学学报，２００９，３０（２）：１０－１４．
　　［１７］ ＹＡＮ Ｆ， ＭＣＢＲＡＴＮＥＹ Ａ Ｂ， ＣＯＰＥＬＡＮＤ Ｌ． Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ａｎｄ ｕｎｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ： Ａ ｈｏｒｉｚｏｎｓ ｏｆ ｖｅｒｔｉｓｏｌｓ ｉｎ ＮＷ Ｎｅｗ Ｓｏｕｔｈ Ｗａｌｅｓ［Ｊ］． Ｇｅｏｄｅｒｍａ， ２０００， ９６：３２１－３４３．
　　注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文