【食醋中对羟基苯甲酸酯GC测定固相萃取条件优化探讨】对羟基苯甲酸
摘要：使用C18固相萃取小柱，系统研究了食醋中对羟基苯甲酸酯固相萃取预富集方法，考虑影响回收率的四个主要因素，即上样速率、洗脱溶剂、洗脱溶剂用量、洗脱速率，利用正交试验进行萃取条件优化，成功地确定上样速率4mlomin-1，洗脱溶剂为甲醇，洗脱溶剂用量2ml，洗脱速率2mlomin-1为优化的萃取条件，此时得到对羟基苯甲酸甲酯（MPB）、对羟基苯甲酸乙酯（EPB）、对羟基苯甲酸丙酯（PPB）、对羟基苯甲酸丁酯（BPB）的回收率分别为在96.5%～120%范围内，相应化合物的液-液萃取回收率为92.9%～120%，表明固相萃取在测定对羟基苯甲酸酯中可以取代液-液萃取。
关键词：C18固相萃取柱；对羟基苯甲酸酯；GC
中图分类号：TF804.2 文献标识码：A
对羟基苯甲酸酯的测定常采用气相色谱法[1]，由于其在食品中的残留量一般很低，需要富集方能检出，本文选用固相萃取(SPE)技术处理食醋样品，获得了良好的萃取效率和富集数。与传统的液一液萃取相比，SPE技术具有操作简便快速、有机溶剂用量少且能除去一些杂质等优点[2]。
1 实验部分
1.1 仪器
GC-2010气相色谱仪，具有氢火焰离子化检测器，山东金普仪器厂；固相萃取装置：美国Supelco公司12管防交叉污染SPE萃取装置；固相萃取柱：Agilent technologies，Accubond IISPE ODS-Cl8 Cartridges，500mg，6ml；无油隔膜真空泵：GM-0.50，天津市腾达过滤器件厂。
1.2 实验方法
1.2.1 固相萃取操作步骤
（１）SPE ODS-C18小柱的活化：先用10ml甲醇分两次活化C18小柱(让其完全浸润柱子后弃去流出液)，再用10ml过0.45μm滤膜的重蒸馏水分两次活化C18小柱，在活化过程中，柱床上方始终保持至少1ml溶液，勿让萃取柱变干。萃取柱处于水溶性状态和活化状态备用。（２）样品的富集 固相萃取装置，安装8只Accubond IISPE ODS-Cl8 rtridges，500mg，6ml固相萃取小柱。使样品连续通过活化过的C18小柱，自然滴落进行固相萃取，在萃取结束之前，柱床始终保持湿润。当所有的样品穿过萃取柱后，开启真空泵抽吸10min，使柱子干燥，关闭真空泵。（３）萃取柱的洗脱：分别用相应的洗脱液共5ml浸泡并缓慢流过C18固相萃取柱，当所有的洗脱液穿过萃取柱后，开启真空泵抽吸10min，使柱子干燥，关闭真空泵。最后用氮气将收集液吹干，用丙酮洗脱并定容为0.5ml。
1.2.2 定量分析
1.2.2.1 色谱柱：毛细管柱：内涂SE-30固定液，30m×0.32mm×0.33μm；玻璃柱：内径3mm，长2.6m，内涂3%SE-30固定液，60目～80目chromosorb W AW DMC5。气流：高纯氮气100 KPa，空气480 KPa，氢气200 KPa。温度：进样口200℃，柱温180℃ 。色谱柱升温和控温程序：
120℃（2min）5℃/min200℃10℃/min250℃
1.2.2.2 定量方法：将对羟基苯甲酸酯4种标准品混合配成浓度为10 g/ml的标准溶液10ml，分别取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml混标液配成10 ml，则浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g／ml，分别取2μl进样，GC分析。通过标准曲线求出4种防腐剂含量，从而求出回收率进行正交设计的统计分析。
2 实验结果与讨论
2.1 方法的线性关系与出峰顺序
在本文实验条件下，4种防腐剂在0．2～1μg范围内均有良好的线性关系(见表1)。
表1 MPB、EPB、PPB、BPB在
实验条件下的线性关系
Y为峰面积，X为对羟基苯甲酸酯含量
出峰顺序依次为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯；保留时问分别为5.543min、7.879min、11.481min、18.379min。
2.2 正交设计表
研究食醋中对羟基苯甲酸酯SPE最佳实验条件的选择，选取上样速率、洗脱溶剂、洗脱溶剂用量及洗脱速率四个因素对对羟基苯甲酸酯回收率的影响，设计了3水平4因子（34）正交试验表，正交试验结果见表2。
正交试验结果分析：计算每一因素每一水平下试验指标（即回收率）的平均值，由平均值求出试验指标随因素水平变化而改变的最大范围即极差R，结果见表3。从4因素极差R影响大小分析，洗脱液对4种酯影响均最大，其次是洗脱速率，再次为洗脱体积的影响，水样流速的影响最小。因此选择流速为4mlomin-1，洗脱液为甲醇，洗脱体积为2ml，洗脱速率为2mlomin-1，既保证了较高的回收率，又使萃取能在较短时间内完成。
表2 正交试验回收率/%
3 小结
固相萃取技术用于食品中有害物质的预富集，具有操作简单，易于自动化，有机溶剂损耗小等突出优点，与毛细管气相色谱联合使用，在进行食品有害物质残留分析时能得到较好的回收率[3]。研究表明，目前样品的前处理过程仍是十分活跃的研究领域，SPE技术也在不断发展与完善。随着进一步对萃取方法的选择优化和对分析物与样品基体间相互作用的理解，SPE方法的应用范围将日趋广泛；随着SPE-GC联用技术的应用和发展[4]，在不远的将来，终将建立一种完全自动化在线采样和分析的SPE-GC/MS体系。
参考文献
[1]鲍忠定,许佳飞,许荣年,等.毛细管气相色谱内标法同时测定食品中8种防腐剂[J].分析化学,2004,32(2):270．
[2]Thuramn EM,Mills MS.Solid-Phase extraction Principles andPractice[M].New York,1997
[3]李青，方赤光，金秀华，等．固相萃取气相色谱法测定粮食中的五氯硝基苯[J].中国公共卫生.1996,12(4):168-169
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