固相微萃取 气相色谱 [顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱法分析柱状田头菇挥发性成分]
以柱状田头菇（Agrocybe cylindracea）子实体干品及其经蒸馏得到的的馏分为萃取样品，采用顶空固相微萃取法（headspace solid-phase micro-extraction, HS-SPME）进行挥发性成分提取，气相色谱-质谱法（gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS）进行定性定量分析，综合评价柱状田头菇子实体挥发性成分。试验共检测到99种挥发性成分，其中干品样品59种，主要为酸类；馏分中55种，主要为醛类和酮类；干品和馏分中检测到相同组分有15种。
柱状田头菇（茶树菇）； 干品； 馏分； 挥发性成分； 顶空固相微萃取； 气相色谱-质谱法
柱状田头菇（Agrocybe cylindracea）又名茶树菇、杨树菇等，是一种木腐药食两用真菌，生长于温带至亚热带地区，气味香浓, 营养丰富, 富含多糖、蛋白质和矿物质［1］。目前关于柱状田头菇的栽培、活性成分研究已有报道［2-6］。
食用菌因含有挥发性芳香物质而风味独特，香气可以增强食欲，刺激消化液的分泌和促进人体对营养成分的消化吸收［7］。食用菌风味物质的开发利用也日渐受到研究者关注，但关于柱状田头菇风味物质的研究还少有报道。
相对于传统挥发性成分分析技术，顶空固相微萃取采用一根聚合物涂层的熔融石英纤维从样品基质中或样品上方的顶空气体中直接吸附萃取待测物，然后在色谱进样口解吸、分析，可以克服使用有机溶剂萃取带来的污染，同时减少被分析成分的损失，集采样、萃取、浓缩、进样于一体，可与气相色谱、液相色谱联用，简单、快速地分析样品［7］。笔者利用顶空固相微萃取技术对柱状田头菇干品和经水汽蒸馏萃取法获得的馏分中的挥发性成分进行提取，应用气相色谱-质谱法分析化学组成，旨在研究柱状田头菇中的挥发性成分组成和探讨萃取方法对其挥发性成分的影响，为柱状田头菇风味物质的开发利用提供参考。
1 材料与方法
1.1材料
柱状田头菇（A. cylindracea）子实体干品购自上海百信生物科技有限公司。子实体干品于60 ℃烘干48 h，粉碎，过200目筛。
1.2仪器
Supelco固相微萃取装置，配有65 μm PDMS/DVB萃取纤维头（Supelco公司，美国）；DJ-10A中药粉碎机（上海淀久中药机械制造有限公司，中国）；FA2004N电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司，中国）；Agilent 7890A /5975C气相色谱/质谱联用仪（Agilent公司，美国）。
1.3挥发性成分测定
1.3.1固相微萃取样品制备
称取2 g子实体干粉，作为固相微萃取干品样品，置于15 mL专用采样瓶中；称取25 g子实体干粉于蒸馏萃取装置，加水250 mL，浸泡 0.5 h，100 ℃水浴常压蒸馏，蒸馏萃取2 h，取 8 mL馏分于15 mL专用采样瓶中，此为固相微萃取馏分样品［8］。
1.3.2固相微萃取条件
将固相微萃取装置的萃取纤维头分别插入装有干品样品或馏分样品采样瓶中，50 ℃下顶空萃取40 min，萃取后立即将其插入气相色谱仪进样口，250 ℃解析2 min［9,10］，进行GC-MS检测。
1.3.3GC-MS检测
1.3.3.1 色谱条件
色谱柱：HP-INNOWAX毛细柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；升温程序：40 ℃保持 3 min，以5 ℃/min升至150 ℃，保持1 min，以 10 ℃/min升至220 ℃，保持10 min；载气(He)流速： 1.0 mL/min，进样口温度：250 ℃，不分流模式。
1.3.3.2 质谱条件
电子轰击（EI）离子源，电子能量70 eV，传输线温度280 ℃，离子源温度230 ℃，质量扫描范围m/z 40～400。
1.4数据分析
挥发性成分经质谱扫描后，在色谱工作站得到总离子流量图，经MAINLIB、NISTDEMO、WILLEY 3个标准谱库检索，进行特征离子及相对丰度比较，确定各色谱峰对应的化学成分。挥发性成分的相对质量分数采用峰面积归一化法进行计算。
2 结果与分析
柱状田头菇干品固相微萃取样品和馏分固相微萃取样品经GC-MS分离鉴定出的挥发性成分总离子流图谱分别如图1-A和图1-B所示。可以看出，柱状田头菇干品和馏分中的挥发性成分实现有效分离，化合物出峰时间集中在15～ 40 min之间；柱状田头菇馏分的挥发性化合物响应值高于干品。
经过质谱数据谱库检索，鉴定出干品和馏分中挥发性成分共99种（包括同分异构体），表明柱状田头菇挥发性成分复杂，干品中挥发性成分有59种，馏分中挥发性成分有55种，主要成分相对质量分数有显著差异（表1）。
李 文，等：顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱法分析柱状田头菇挥发性成分
图1 柱状田头菇干品（A）和馏分(B)固相微萃取后GC-MS总离子色谱图
Fig. 1 GC-MS total ion chromatograms of volatile components extracted using HS-SPME from dried fruit bodies (A)
and a distilled fraction (B) of A. cylindracea
干品中，酸类挥发性成分相对质量分数最高，为33.38%（9种），其次为醛类12.99%（9种），香味阈值为0.04 μg/kg的呋喃酮类挥发性成分相对质量分数达到11.16%（6种）。干品中检出的3-甲基丁酸相对质量分数为20.07%，远远高于其他挥发性成分，其用途主要用以配制干酪和奶油香精，亦微量用于制作水果型香精［11］。八碳以下挥发性成分，相对质量分数高达 63.08%（37种），而八碳与八碳以上挥发性成分在相对质量分数和化合物数量上均相差不大。由此可见，对柱状田头菇干品直接进行固相微萃取，检测出的小分子挥发性成分较多，说明小分子挥发性成分在柱状田头菇干品风味中发挥作用较大。