酿酒酵母 人乳头 疫苗 离子液体［ＢＭＩＭ］Ｃｌ对酿酒酵母生长及其乙醛脱氢酶活性的影响
摘要：设置单因素试验考察不同浓度离子液体氯化１－丁基－３－甲基咪唑（［ＢＭＩＭ］Ｃｌ）对酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＡＳ２．３９９生长及其乙醛脱氢酶活性的影响。结果表明，［ＢＭＩＭ］Ｃｌ对酵母的生长有抑制作用，且其浓度越高，抑制作用越明显；低浓度的［ＢＭＩＭ］Ｃｌ可以提高酵母乙醛脱氢酶的活性，高浓度则会抑制其活性。
关键词：氯化１－丁基－３－甲基咪唑（［ＢＭＩＭ］Ｃｌ）；酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＡＳ２．３９９；生长；乙醛脱氢酶活性
中图分类号：ＴＱ２０９；Ｑ１４２．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）15－3306-02
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｉｏｎｉｃ Ｌｉｑｕｉｄ １－Ｂｕｔｙｌ－３－Ｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｎｅ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ａｌｄｅｈｙｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
ＬＩＵ Ｙａｎｇ－ｙａｎｇ１，ＴＯＮＧ Ｙａｎ－ｊｉｅ２，ＳＯＮＧ Ｙａｎｇ２，ＺＨＡＮＧ Ｒｕｉ２，ＺＨＵ Ｓｈｅｎｇ－ｄｏｎｇ２，ＷＵ Ｙｕａｎ－ｘｉｎ１，２
（１．Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００７0， Ｃｈｉｎａ；
２． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｗｕｈａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００７３， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄ １－ｂｕｔｙｌ－３－ｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｎｅ（［ＢＭＩＭ］Ｃｌ） ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ａｌｄｅｈｙｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＡＬＤＨ） ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＡＳ２．３９９ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｓｉｇｎａｌ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ［ＢＭＩＭ］Ｃｌ ｃｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｙｅａｓｔ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈｅ［ＢＭＩＭ］Ｃｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ． Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＬＤＨ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｂｙ ｌｏｗ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ［ＢＭＩＭ］Ｃｌ ｗｈｉｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： １－ｂｕｔｙｌ－３－ｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｎｅ（［ＢＭＩＭ］Ｃｌ）； Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＡＳ２．３９９； ｇｒｏｗｔｈ； ＡＬＤＨ ａｃｔｉｖｉｔｙ
离子液体（Ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄｓ，ＩＬｓ）是指在室温或者接近于室温下呈液态的由离子构成的有机盐［１］。离子液体作为一种新型有机溶剂，具有无可测蒸汽压、可循环使用、对空气无污染等优点［２，３］，已被成功地应用到化学合成、化学分离以及电化学等方面［４］。随着离子液体在工业上的广泛应用，其自身的绿色性也越来越受到关注，如其在自然界和生物体内如何降解，累积度对生物体的毒性如何等［５］。乙醛脱氢酶又称醛脱氢酶，是一类依赖ＮＡＤ（Ｐ）的氧化还原酶，可催化乙醛或其他醛类转化成对应的酸类［６，７］，能缓解饮酒后大量乙醇代谢成乙醛对人体造成的毒害［８］，是近年来研究的热点［９，１０］。本研究以实际生产中应用最为广泛的离子液体氯化１－丁基－３－甲基咪唑盐（［ＢＭＩＭ］Ｃｌ）为研究对象，考察其对酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＡＳ２．３９９生长及其乙醛脱氢酶活性的影响，为离子液体的推广应用及安全性鉴定提供一定的理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料与仪器
酿酒酵母ＡＳ２．３９９为武汉工程大学化工与制药学院４１２实验室保藏菌株。实验用离子液体［ＢＭＩＭ］Ｃｌ购自河南利华制药公司；其他化学试剂均购自国药集团化学试剂有限公司；生物培养基购自北京双旋微生物培养基制品厂。Ｏｎｅ ｓｈｏｔ高压细胞破碎仪（Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ）；ＵＶ－２１０２ＰＣ型紫外分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；ＵＮＩＶＥＲＳＡＬ ３２Ｒ台式冷冻离心机（德国Ｈｅｔｔｉｃｈ公司）。
１．２ 方法
１．２．１ ［ＢＭＩＭ］Ｃｌ对酵母菌体生长的影响 分别配制［ＢＭＩＭ］Ｃｌ浓度为０．００１、０．１００、２．０００、５．０００、２５．０００、５０．０００和１００．０００ ｍｇ／ｍＬ的ＹＰＤ液态培养基，接种后培养基ＯＤ６００ ｎｍ＝０．１２５，培养至菌体生长到一定浓度时取样（接种后每隔２～３ ｈ取样，具体根据菌体生长情况决定，下同）并测定其在６００ ｎｍ处的吸光度。
１．２．２ ［ＢＭＩＭ］Ｃｌ对酵母乙醛脱氢酶活性的影响 将酵母接种到添加了不同浓度［ＢＭＩＭ］Ｃｌ的ＹＰＤ培养基中，每隔２～３ ｈ取样测ＯＤ６００ ｎｍ，并稀释到ＯＤ６００ ｎｍ＝１．０００，用高压细胞破碎仪将其破碎，４ ℃下12 ０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ，取３００ μＬ上清液加入酶活反应体系（２０ ｍｍｏｌ／Ｌ烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 ０．１0 ｍＬ、１ ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ０．３0 ｍＬ（ｐＨ ８．０）、１ ｍｏｌ／Ｌ巯基乙醇 ０．０５ ｍＬ、１００ ｍｍｏｌ／Ｌ乙醛０．１0 ｍＬ、３ ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ ０．１0 ｍＬ；双蒸水２．０５ ｍＬ），立即测试其在３４０ ｎｍ处的吸光度。