樟芝益菌丝体_樟芝菌丝体发酵全液冻干粉长期食用安全性评估

　　取0.5 cm ×0.5 cm的PDA平板上长好的樟芝体菌块，接种至2 L 三角瓶中（含1 L液体培养基），经25 ℃、100 r/min振荡培养2周后接入500 L发酵槽（含400 L液体培养基），并在90 r/min 搅拌速率，通气量0.5 vvm，25 ℃条件下培养 7 d，再接入50吨发酵槽（含40 吨液体培养基），50 r/min搅拌，通气量0.5 vvm，25 ℃下培养 14 d后得樟芝菌丝体发酵液，经冷冻干燥机干燥，磨粉机磨粉后，经过40目孔径筛网后得樟芝菌丝体发酵液冻干粉。
　　1.4动物来源
　　SPF级Sprague Dawley大鼠［许可证号：SCXK（沪）2002-0010］由中国科学院上海实验动物中心提供。动物适应约1周后选出体重60～80 g、7周龄健康大鼠80只（雌雄各半）进行试验。大鼠饲养温度20～25 ℃，相对湿度40%～70%，动物饲养料由苏州双狮实验动物饲料科技服务有限公司提供。
　　1.5大鼠90 d喂养及指标测定
　　将动物按雌雄各半随机分为4组，每组20只，分别作为3个剂量组及空白对照组。按樟芝菌丝体发酵液冻干粉量与大鼠体重比，设计低、中、高3个剂量0.5、1.5、4.5 g/kg，具体操作是：分别将樟芝菌丝体发酵液冻干粉50、150、450 g掺入10 kg饲料内，拌匀，经饲料机制成颗粒，即成低、中、高3种不同樟芝菌丝体发酵液冻干粉含量的饲料，分别喂养3组动物，空白对照组给予不含樟芝菌丝体发酵液冻干粉的同种饲料。动物单笼喂养，按照每天100 g体重喂食10 g，自由饮食，连续喂养90 d。喂食后，观察动物的一般状态、体重变化、中毒症状和死亡情况，肉眼观察病理情况。实验开始时及实验后每7 d称量一次动物体重，并记录食物摄取量，计算食物利用率（食物利用率＝增重／食物摄取量×100%）。连续喂养90 d后，第91天再次逐只称重随即处死。对死亡动物及到期处死动物进行尸体解剖。心脏取血，采用血液分析仪作血液学分析，将血液静置后，离心分离血清，以血清生化仪作生物化学和电解质分析，采用尿液分析仪对尿液进行分析。解剖观察肝、肾、肾上腺、脾、心、脑、性器官等脏器有无明显病变，并取脏器称重，计算脏体比；并送上海市预防医学研究院，对肝、肾、脾、胃、肠、肾上腺、脑、食道、心、气管及肺、淋巴结、胰腺、视神经、垂体、前列腺、脊髓、甲状腺、膀胱、子宫、性器官等脏器进行组织病理学检查。
　　陈泰伊，等：樟芝菌丝体发酵全液冻干粉长期食用安全性评估
　　1.6统计学处理
　　采用SPSS统计软件中单因子变异数分析的邓氏检定法分析各组间的动物体重、食物摄取量、脏体比、血液学及生物化学的差异性，以P＜0.05为具有统计学意义。
　　2 结果与分析
　　2.1生长状况及食物利用率
　　所有大鼠在90 d内生长状况良好，体重每周皆有增加，说明这些摄取量对动物安全。各实验组大鼠毛色光泽度好，未观察到异常。雄性大鼠在91 d内总体重的增加明显大于雌性，但在第56 天以及第91天时，雌性大鼠的食物利用率及食物摄取量均比雄性大鼠高。各实验组大鼠在体重增加及食物摄食情况方面与对照组相比，均无统计学差异（表1）。
　　All values expressed as ±s (n=10). *Feed efficiency rate=increase in body weight feed intake× 100%
　　2.2脏体比
　　所有组别雄性大鼠肝、肾、脾的脏体比明显高于雌性（P＜0.05)，但雌性大鼠的脑体比稍高于雄性，雄性大鼠的心体比以及肾上腺体比稍高于雌性，但组间无统计学差异。各实验组大鼠脏体比（肝、肾、脾、睪丸/卵巢、心脏、肾上腺、脑）与对照组相比，均无统计学差异(表2) 。脾脏与肝脏肉眼观察皆未发现异常或肿大。
　　2.3血液学
　　所有大鼠的红细胞、血色素、白细胞数及其分类的淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞检查结果均在正常范围内，各实验组与对照组相比，均无统计学差异（表3）。
　　2.4生物化学
　　雄性大鼠的总胆红素平均含量略高于雌性，但其碱性磷酸酶含量明显高于雌性。所有大鼠的血清总蛋白质、葡萄糖、白蛋白、胆固醇、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、甘油三酯、肌酐、总胆红素等生物化学检查结果均在正常范围内，各实验组与对照组相比，均无统计学差异（表4）。因此樟芝菌丝体发酵全液冻干粉不会造成试验动物的生化学检查项目变化。
　　2.5电解质
　　雌性大鼠血液中的钙平均含量明显高于雄性，所有大鼠的钙、钠、钾、氯化物检查结果均在正常范围内，各实验组与对照组相比，均无统计学差异（ 表5），表明动物体内电解质量平衡无异常。因此樟芝菌丝体发酵全液冻干粉不会造成试验动物的电解质检查项目变化。
　　2.6尿常规
　　偶有个别阳性发现，个别项目阳性数不超过1例，比例基本相同（表6）。
　　表格内的数值表示实验结果中的阳性数或异常数，以雄性/雌性大鼠数目表示胆红素阳性指尿液中胆红素含量＞7 μmol/L；酮体阳性指尿液中酮体含量＞0.5 mmol/L乙酰乙酸；比重阳性指尿液比重1.000～1.030；酸碱度阳性指尿液酸碱度5～9；尿胆元阳性指尿液中尿胆元含量＞3 μmol/L；n=10
　　Values shown represent the number of male/number of female rats exhibiting a positive response defined as follows: positive bilirubin: urine bilirubin>7 μmol/L; positive ketone: urine ketone ＞0.5 mmol/L ethyl acetate; positive specific gravity: urine specific gravity 1.000-1.030; positive pH: pH 5-9; positive urobilinogen: urobilinogen ＞3 μmol/L; n=10