真菌感染用什么药最好 一株产生抑菌气体内生真菌的拮抗活性评价

　　摘要：ＨＮＤ５是一株分离自臂形草的内生真菌，对其拮抗作用评价结果表明，该菌株能够产生对１１株病原真菌有较好拮抗作用的挥发性气体，对峙培养表明其对这些菌株有较好拮抗作用，而其无菌滤液仅对部分病原真菌有一定的拮抗作用，挥发性气体可能是其抑菌作用的主要机制。
　　关键词：植物内生真菌；抑菌气体；拮抗活性
　　中图分类号：S482.2+92 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1803-03
　　
　　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ａｎ Ｅｎｄｏgeneｔｉｃ Ｆｕｎｇｉ Generating Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｇａｓ
　　
　　ＳＨＩ Ｔａｏ，ＨＵＡＮＧ Ｇｕｉ－ｘｉｕ
　　（Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， ＣＡＴＡＳ ／ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ
　　Ｆｏｒｅｓｔ Ｉｎｖａｓｉｖｅ Ａｌｉｅｎ Ｐｅｓｔｓ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｄａｎｚｈｏｕ，５７１７３７， Ｈａｉｎａｎ， Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： ＨＮＤ５ ｉｓ ａｎ ｅｎｄｏgeneｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｂｒａｃｈｉａｒｉａ ｂｒｉｚａｎｔｈａ， ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ and tｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＮＤ５ had ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｎ １１ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｆｕｎｇｉ． Ｉｎ ｃｏｎｆｒｏｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ， ＨＮＤ５ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅｓｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｆｕｎｇｉ， ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｇｅｒｍｆｒｅｅ ｆｉｌｔｒａｔｅ ｏｆ ＨＮＤ５ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｎ only ３ ｓｔｒａｉｎｓ， ｓｏ ｔｈｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｇａｓ ｐｌａｙed ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｅｎｄｏgeneｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓ； ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｇａｓ； ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　内生真菌是指生活史的部分阶段或者整个生活史均生活在植物体内，且对植物组织没有引起明显症状的真菌［１］。
　　内生真菌和宿主植物之间为互利共生关系，后者能够为内生真菌提供生存空间、水分和养分，保护其不受外界环境的影响，使其可以在宿主体内长期存在，而内生真菌可以分泌有益活性产物而对宿主起到促生、抗逆境等作用。拮抗性内生真菌能够产生抑菌活性物质，和宿主植物一起作为一个“共生体”而抵御外界病原物的侵染，起到类似抗病基因的作用。由于宿主植物的保护作用，拮抗性内生真菌在应用于生防时其防效稳定性和持久性得到了很大的提高，因而成为当前植物病理学家研究的一个热点。
　　ＨＮＤ５是一株分离自臂形草的枝顶孢属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）内生真菌［２］，研究表明该菌对芒果炭疽病菌、香蕉枯萎病菌和水稻稻瘟病菌有较强的拮抗作用，而且具有内生性。在前期研究的基础上，我们选取了１１株热带地区常见的病原真菌，采用３种方法对该菌株的拮抗活性进行评价，现将研究结果报告如下。
　　１材料与方法
　　１．１试验材料
　　１．１．１供试菌株病原真菌芒果炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、竹子枯萎病菌、橡胶树炭疽病菌、橡胶树多主棒孢病菌、木瓜棒孢霉病菌、臂形草叶斑病菌、水稻稻瘟病菌、水稻胡麻叶斑病菌、甘蔗赤腐病菌和内生真菌ＨＮＤ５，均由中国热带农业科学院环境与植物保护研究所提供。
　　１．１．２供试培养基菌株培养选用ＰＤＡ培养基，配方参见文献［３］。
　　１．２试验方法
　　１．２．１菌株准备ＨＮＤ５和各病原真菌均在ＰＤＡ平板上培养７ ｄ后，用灭菌打孔器在菌落边缘打取直径４ ｍｍ的菌饼备用。
　　１．２．２拮抗活性评价方法
　　１）平板对峙法。在直径９ ｃｍ的培养皿中倒入２０ ｍＬ融化的ＰＤＡ培养基，制备同样厚度的平板，在中央接种各病原真菌菌饼，在距离３ ｃｍ处接种ＨＮＤ５菌饼，以不接ＨＮＤ５处理为对照。２８ ℃培养７ ｄ后观察并测量菌落直径，重复３次。
　　２）带毒平板法。打取２个ＨＮＤ５菌饼，接种１００ ｍＬ液体ＰＤＡ培养基，２８ ℃，１８０ ｒ／ｍｉｎ培养７ ｄ，再在同样条件下按１∶２５的比例扩大培养１４ ｄ，最后在２８ ℃静置暗培养１４ ｄ。离心取上清液，制备无菌滤液（用液体ＰＤＡ调ＯＤ６００nm值０．４～０．５），按照体积比１∶１０制备带毒ＰＤＡ平板，在中央接种各病原真菌菌饼，以不加菌液为对照，２８ ℃培养７ ｄ后观察并测量菌落直径，重复３次。
　　３）双皿对峙法。制备直径为９ ｃｍ的ＰＤＡ培养基平板，接种ＨＮＤ５后２８ ℃培养１５ ｄ，轻轻将皿盖移去。在新制备的ＰＤＡ平板中央接种各病原菌菌饼，将其倒扣在已培养好的、带有ＨＮＤ５的皿底上，用Ｐａｒａｆｉｌｍ膜封口，２８ ℃共培养７ ｄ，以同时接种的病原菌为对照，重复３次。
　　各种方法的抑菌率均按以下公式计算：
　　抑菌率＝（对照菌落直径－各处理菌落直径）／（对照菌落直径－原菌饼直径）×１００％。
　　２试验结果
　　２．１ＨＮＤ５对病原真菌的平板对峙拮抗作用
　　平板对峙试验结果（图１，表１）表明，ＨＮＤ５对供试的８种病原真菌均具有较强的拮抗活性，抑菌距离达到０．４～１．４ ｃｍ，抑菌率为（５４．６±１．１）％～（９１．０±３．４）％。
　　２．２ＨＮＤ５无菌滤液对病原真菌的拮抗作用
　　采用带毒平板法评价了ＨＮＤ５的无菌滤液对病原真菌的拮抗作用，结果表明无菌滤液抑菌作用较差，仅对臂形草叶斑病、木瓜棒孢和水稻胡麻叶斑病菌具有一定的抑制作用，抑制率分别为（３６．８±２．６）％、（４２．２±１．８）％和（５１．６±３．１）％，图２为ＨＮＤ５无菌滤液对臂形草叶斑病菌的拮抗作用。
　　２．３ＨＮＤ５所产生活性气体对病原真菌的拮抗作用
　　采用双皿对峙法评价了ＨＮＤ５所产生活性气体的抑菌作用，结果（图３，表２）表明其对１１种病原真菌都有抑菌作用，其抑菌率为（５８．８±１．２）％～（８６．７±２．２）％（表２）。
　　３结论与讨论
　　本实验室的前期研究结果表明，ＨＮＤ５对芒果炭疽病菌、香蕉枯萎病菌和水稻稻瘟病菌均有较好的拮抗作用，本研究的平板对峙试验和双皿对峙试验均表明该菌株对包括这３种病菌在内的１１种病原真菌有较好的拮抗作用。枝顶孢属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）中的很多种都是常见的内生真菌，广泛分布于禾本科旗草［４］、臂形草和木本的沙棘［５］、麻疯树［６］、见血封喉［７］等植物组织内。本实验室已证明ＨＮＤ５能够内生于臂形草［２］，该菌株对１１种我国热带地区常见植物病害的病原菌均有较好的拮抗作用，表明其在热区植物病害生防中有较广泛的应用范围。
　　平板对峙和双皿对峙结果均表明ＨＮＤ５对１１种病原真菌有较好的拮抗作用，而其无菌滤液仅对臂形草叶斑病、木瓜棒孢和水稻胡麻叶斑病菌有一定的拮抗作用。分析ＨＮＤ５产生的抑菌作用物质，除挥发性气体外，还有部分分泌于培养液中。ＨＮＤ５的无菌滤液仅对３种病原真菌有一定的拮抗作用，表明挥发性抑菌气体在其拮抗作用中起主要作用。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 　　对于挥发性抑菌气体的研究，目前国内外植物源方面的研究较多，而关于真菌所产生的挥发性抑菌气体则研究很少。张薇等［８］对银杏、桂花、悬铃木等２０种园林植物进行了研究，发现它们能产生间羟基苯甲酸（Ｍ－ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）、水杨酸甲酯（Ｍｅｔｈｙｌ ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）、邻苯二酚（Ｃａｔｅｃｈｏｌ）等多种挥发性抑菌物质。关于真菌所产生的挥发性抑菌气体，分离自锡兰肉桂的内生真菌Ｍｕｓｃｏｄｏｒ ａｌｂｕｓ研究的较多。该菌可以产生挥发性活性天然气体化合物，这种化合物不但可以高度有效地防治植物病原真菌和细菌，而且对许多人类病原微生物具有强有力的抑制活性。２００２年，美国ＡｇｒｅＱｕｅｓｔ公司以该菌株为基础，独家推出世界上第一种能够提高植物抗真菌病害能力的真菌熏蒸剂［９］。本研究通过双皿对峙法发现ＨＮＤ５菌株能够产生有较强抑菌作用的挥发性气体，也为我国新型生物源农药的研制提供了菌源。
　　参考文献：
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