CO+NO SMAO休克过程兔肾组织NO、CO、H2S的动态变化观察

　　摘 要:目的—— 观察肠系膜上动脉夹闭性休克(SMAO休克)过程兔肾组织中一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)、硫化氢(H2S)的动态变化。方法—— 随机取40只新西兰大耳白兔分为5组:假手术组、缺血60min组(I组)、缺血60min再灌注30min组(I/R30min组)、缺血60min再灌注60min组(I/R60min组)、缺血60min再灌注120min组(I/R120min组),每组8只。检测SMAO休克过程各组兔肾组织NO、CO、H2S的动态变化。结果与假手术组相比,I组肾组织匀浆NO含量明显增高,再灌注后NO降低(P<0.01);实验各组肾组织匀浆CO均降低(P<0.01);I组的肾组织匀浆H2S含量明显增高(P<0.01),再灌注30min达到最高,之后逐渐降低(P<0.01)。结论—— SMAO休克致内毒素血症,随着再灌注时间的延长肾组织中NO、CO和H2S的动态变化,参与了肾脏的损害。
　　关键词:SMAO休克 气体分子 动态变化
　　中图分类号:R459.7 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2012)05(a)-0249-02
　　目前,内毒素休克仍然是死亡率较高的病症,内毒性休克不仅可以通过外源性感染导致,晚期的感染性休克,会因为肠屏障损伤而致使肠源性内毒素及细菌的转移,在内毒素性休克及多器官功能衰竭的发病过程中,这个原因具有关键性的作用。在创伤或休克时最容易受伤害的目标器官就是肠道,多器官功能障碍(MODS)、全身炎症反应综合征(SIRS)中的枢纽器官也是肠道,更是炎症介质的扩增器,含有人认为肠道是创伤后MODS发生的“发源地”。本实验观察SMAO休克过程中,兔远隔脏器肾组织气体分子(NO、CO和H2S)的动态变化。以此探讨肠源性休克致内毒素血症过程中气体分子的变化及其与肾脏损害的关系。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验动物及分组
　　取40只体重在2.5kg左右,雌雄不限的清洁级新西兰大耳白兔,随机分为5组:假手术组、缺血60min组(I组)、缺血60min再灌注30min组(I/R30min组)、缺血60min再灌注60min组(I/R60min组)、缺血60min再灌注120min组(I/R120min组),每组8只。
　　1.2 药品与试剂
　　氨水分析纯,联二亚硫酸钠分析纯,乙酸锌分析纯,三氯化铁分析纯,三氯乙酸分析纯,盐酸,甲醛溶液分析纯,NO试剂盒。
　　1.3 方法
　　手术前12h兔自由饮水,但禁止进食,20%乌拉坦耳缘静脉麻醉,常规消毒,取上腹部正中切口入腹,游离肠系膜上动脉(SMA),假手术组不做进一步处理,处死兔取肾;I组:以粗棉线活结阻断肠系膜上动脉(SMA)血流,持续60min,轻柔打开棉线结形成再灌注(缺血期间及再灌注后均关腹),分别在缺血,再灌注30,60,120min时间点处死兔,快速取0.5g肾组织,放入预冷的生理盐水溶液中,用手动玻璃匀浆器在4℃冰水中制成10%肾组织匀浆,3500r/min,离心10min,检测上清液中NO、CO、H2S的含量,用NO试剂盒检测NO,CO根据Chalmers及联二亚硫酸钠法进行检测,采用去蛋白的方法测定H2S。
　　1.4 统计学处理
　　将取得数据通过SPSS16.0统计软件包进行处理,计量资料用均数±标准差(x-±s)表示,方差齐时,用成组设计的方差分析进行检验,方差不齐时,采用秩和检验进行相应的统计分析,检验水准α<=0.05。
　　2 结果
　　2.1 各组肾组织匀浆NO、CO、H2S的动态变化
　　与假手术组相比,I组肾组织匀浆NO含量明显增高,再灌注后NO降低(P<0.01);与假手术组相比,实验各组肾组织匀浆CO均降低(P<0.01);肾组织匀浆H2S含量在I组明显增高(P<0.01),再灌注30min达到最高,而后逐渐降低(P<0.01)(见表1)。
　　3 讨论
　　由于对缺氧缺血的敏感性,肠道也是机体缺血时最容易受损伤的器官。肠道缺血再灌注损伤也是临床中创伤、烧伤后常见的病理生理过程,不仅可以引起肠道局部损伤,还可致肠源性炎症介质和细胞因子释放,引起远隔脏器损伤。
　　NO是一种内皮源性舒张性因子,由L-精氨酸在一氧化氮和酶(NOS)的作用下产生。内源性的气体分子NO被证实具有舒张血管、抑制细胞增殖、杀灭细胞、肿瘤细胞等多种效应。本实验显示肾组织NO在肠缺血时明显增高,在再灌注后明显降低,此变化与血浆NO变化相近,可能的原因跟舒张血管降低血压、抑制细胞增殖、杀灭细胞而使内源性的气体分子NO被消耗有关。
　　CO是一种神经源性信号分子,同时也是一种细胞损伤的抑制剂,在机体内可以发挥多种病理生理作用。通过本次试验可以看出:如果肠缺血及再灌注后,肾组织中CO都明显降低,其原因可能是肠缺血时内毒素的移位会致使产生大量自由基及细胞因子,会刺激机体,减少内源性的CO释放,也由此减弱细胞损伤的抑制作用,进而引起肾损害。
　　内源性H2S是目前被公认的第三种内源性气体信号分子,它参与神经活动,对多种平滑肌有松弛作用,能抑制血管重建,从而保护血管,并参与休克和炎症。本实验数据表明:在肾组织匀浆中,若肠缺血时,会有所增高,随着再灌注30min时持续增高,继续再灌注,H2S随着时间增加而下降,可能的原因是随着肠屏障功能障碍,细菌、内毒素移位,致使肾组织内毒素增高,H2S参与了肾的损伤。
　　肠源性休克致肠屏障通透性增高,进而致使细菌移位,引发内毒素血症,随着再灌注时间的延长血浆内毒素水平的不断增高,近而引起机体远隔脏器肾组织气体分子发生动态变化,造成肾损伤加重,因此临床上防治肠源性休克时,应在再灌注阶段实施有效的治疗,并加强肾脏的保护。
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