乙醇浸提法提取黑穗醋栗果实中黄酮类物质的研究:黑穗醋栗
摘要以黑穗醋栗果实为试材,以芦丁为标准品,利用分光光度法研究乙醇提取法提取黄酮类物质的最佳工艺条件。在单因素试验结果的基础上设计了L9(34)(4因素3水平)正交试验。结果表明,乙醇提取法提取黄酮的最佳工艺条件为:以95%乙醇为提取剂,提取温度90℃,提取料液比1∶12,提取时间180min。黄酮的最大提取量可达0.723mg/g。
关键词黑穗醋栗;黄酮;乙醇浸提;提取
中图分类号S664.2;TS255.36文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)11-0024-02
黑穗醋栗俗称黑加仑、黑豆果,属虎耳草科茶�子属多年生小灌木。在我国主要分布在北方,黑龙江省资源尤其丰富。果实为紫黑色,圆形,多汁,味酸甜。其果实富含糖、有机酸、维生素、黄酮、矿物质等多种营养成分[1]。
黄酮类化合物在植物中分布范围广、种类多,多数具有显著生理药理活性[2]。近年来,其在抗肿瘤、抗过敏、降血糖等方面的显著作用受到广泛关注。本试验以黑穗醋栗果实为试材,研究了乙醇提取法提取的最佳工艺条件,为黑穗醋栗果实的开发利用提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料与仪器
黑穗醋栗采于东北农业大学园艺站,采样后快速冷冻,装保鲜盒中备用;芦丁,中国药品生物制品检定所;其他试剂均为分析纯。
T6新悦-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);R-205旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司);电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)。
1.2提取工艺流程
试材→打碎→乙醇提取→减压过滤→旋转蒸发→乙酸乙酯萃取→旋转蒸发萃取液→黄酮粗提物→95%乙醇溶解定容→测定含量。
1.3最佳提取条件的确定
1.3.1单因素试验。将黑穗醋栗果实打碎为匀浆,用电子天平精确秤取5g左右,以95%乙醇为提取溶剂,分别考察不同乙醇浓度(35%、50%、65%、80%、95%)、不同提取温度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)、不同料液比(1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12)、不同提取时间(60min、100min、140min、180min、220min)对黄酮类物质含量的影响。每项试验重复3次。
1.3.2正交试验。在单因素试验基础上,以总黄酮含量为考察指标,采用4因素(乙醇浓度、提取温度、料液比、提取时间)3个水平的正交试验表L9(34)安排试验,并对结果进行极差分析,确定黑穗醋栗果实中黄酮类物质的最佳提取条件。
1.4黄酮含量的测定
采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[3]测定黄酮含量。
芦丁柱准曲的线形回归方程为:C=75.944 A-0.349 4,相关系数R2=0.999 7。
黄酮提取量(mg/g)=5CV/W
其中,W-精确称取黑穗醋栗的质量(g);V-提取出黄酮定容的体积(V)。
2结果与分析
2.1乙醇浓度对黄酮提取效果的影响
在提取料液比1∶10、提取温度80℃、提取时间180min条件下,以不同乙醇浓度进行提取,结果如图1。
由图1可知,黄酮提取量随乙醇浓度的增加而增加,增至95%时达到最高,所以选用65%、80%、95%等3个浓度进行正交试验。
2.2提取温度对黄酮提取效果的影响
在提取料液比1∶10、提取时间180min、乙醇浓度95%条件下,以不同提取温度进行提取,结果如图2。由图2可知,黄酮提取量随温度升高而增大,增至80℃时趋于平缓,所以选用70℃、80℃、90℃等3个温度进行正交试验。
2.3提取时间对黄酮提取效果的影响
在提取料液比1∶10、提取温度80℃、乙醇浓度95%条件下,以不同提取时间进行提取,结果如图3。
由图3可知,黄酮提取量随时间延长而增大,增至180min时趋于平缓,所以选用140min、180min、220min等3个时间进行正交试验。
2.4提取料液比对黄酮提取效果的影响
在提取温度80℃、提取时间180min、乙醇浓度95%条件下,以不同提取料液比进行提取,结果如图4。
由图4可知,黄酮提取量随料液比的增大而增大,增至1∶10时达到最大,然后略有下降,所以选用1∶8、1∶10、1∶12等3个条件进行正交试验。
2.5正交试验结果
由表1极差分析可知,本试验讨论的4个因素对提取量影响的显著顺序为:A>C>B>D,即提取液料比>提取温度>乙醇浓度>提取时间。最佳条件组合为:A3B2C3D2,即提取料液比1∶12、乙醇浓度95%、提取温度90℃、提取时间180min,提取量为0.723mg/g。
3结论
试验结果表明,采用乙醇提取法提取黑穗醋栗黄酮的最佳条件为:以95%乙醇为提取溶剂,提取温度90℃,提取时间180min,提取料液比1∶12,此时的提取量可达到0.723mg/g。
4参考文献
[1] 贾�萍.黑龙江省特色小浆果开发及利用[J].中国林副特产,2008,31(4):600-602.
[2] 徐雅琴,付红,于泽源.黑穗醋栗(亮叶)叶片黄酮提取物抗氧化性研究[J].食品科技,2002(7):38-39.
[3] 徐雅琴,孙艳梅,付红,等.穗醋栗叶片中黄酮类物质的研究[J].天然产物的研究与开发,2001(2):221-231.
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