[反相高效液相色谱法测定柴远解郁片中栀子苷的含量] 反相高效液相色谱原理
【摘要】 目的 建立以反相高效液相色谱法测定柴远解郁片中栀子含量的方法。方法 以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15∶85)为流动相；检测波长为238nm；流速1.0 ml/min。理论板数以栀子苷峰计算应不低于2500。结果 栀子浓度线性范围为0.1248 μg～0.6240 μg。平均回收率为99.27，RSD＝0.41%(ｎ＝5)。结论 本法简便、准确、重复性好，可用于柴远解郁片的质量控制。
【关键词】 柴远解郁片；栀子；反相高效液相色谱法
柴远解郁片是我院在研的六类新药，该制剂由柴胡、远志、栀子、巴戟天、五味子、石菖蒲、酸枣仁、茯苓、牡丹皮和半夏药材组成，具有舒肝解郁和安神定志，用于治疗抑郁症(肝郁气滞型)。栀子是柴远解郁片中主要成分之一，在新药研制过程中， 参照2010年版中国药典栀子项下含量测定方法，笔者建立了以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定其中栀子含量的方法。作为控制本品质量的方法之一。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，十八烷基硅烷健合硅胶色谱柱(Diamonsil C18(250 4.6 mm;5 μm)色谱柱(迪马公司)；SPD-10AVP检测器，N2010色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所)，栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用)，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。柴远解郁片由我院试制中心提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15∶85)为流动相；检测波长为238 nm；流速1.0 ml/min；柱温：室温。理论板数以栀子苷峰计算应不低于2500。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含31.2 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.2 g，同时另取本品粉末测定水分(中国药典2010年版附录Ⅸ H第二法)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 阴性溶液的制备 依照柴远解郁片工艺，去上述药材除去栀子，按照工艺要求及原理，制备一批药品，作为阴性供试品。
2.5 干扰试验
取不含栀子的阴性对照液、供试品、对照品各20 μl,注入高效液相色谱仪，依法测定，结果阴性对照液的色谱图在栀子苷色谱峰相应的保留时间处无干扰峰出现，结果见图1，2。
2.6 线性关系考察
精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml中含栀子苷31.2 μg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取4、8、12、16、20 μl，注入高效液相色谱仪，按上述条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，栀子苷的浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程：Y=30243.21+1337910.18X r=0.9997,线性范围：0.1248 μg～0.6240 μg。
2.7 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液，按正文中的含量测定方法测定，重复进样5次，5次测定峰面积分值的RSD为0.17%，结果表明，含量测定方法精密度符合要求。
2.8 重复性试验
取同一批号的样品(批号：20110801)依法独立按正文含量测定方法测定，平均值为1.52(mg/g)，RSD 1.0%，结果表明，含量测定方法重现性符合要求。
2.9 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号：20110801)，按正文中的含量测定方法测定，分别于0、6、12、18、24 h进样一次，测定峰面积，结果供试品溶液色谱峰面积积分值在24 h内基本无变化，供试品溶液在24 h内稳定。
2.10 加样回收率试验
精密量取已知栀子苷含量的样品五份(含量1.52 mg/粒)，精密加入一定量的栀子苷对照品溶液，依法按正文含量测定方法测定，计算回收率，平均回收率99.27%,RSD0.41%。
2.11 样品含量测定
取三批样品，依法按正文含量测定方法测定其含量，根据测定结果，本品每g中含栀子苷平均值为1.50 mg，考虑到在今后实际生产中应有一定损耗，故限定样品中栀子含量以栀子苷(C17H24O10)计不得低于1.0 mg/g(n=5)。
3 讨论
本试验乙腈-水(15∶85)为流动相，组分简单，柱平衡时间短，基线平直，试验后色谱柱易清洗。本试验线性关系良好，线形范围宽，稳定性好，回收率在99.27%，方法可行。因中药成分复杂，多难分离，然用本文所述方法则提取完全，未引入其他杂质，组分分离较佳，理论板数定为2500。
栀子苷为栀子活性成分，本文采用以十八烷基硅烷健合硅胶色谱柱的反相高效液相法对其定量，操作简单，可作为该药材的质量控制法。