药用植物掌叶半夏快繁研究|掌叶半夏
【摘要】掌叶半夏块茎含有B-谷甾醇-D-葡萄糖甙、3，4-二羟基乙酸及葡萄糖甙，还含有多种氨基酸及生物碱等。味辛，性温，有毒。归脾、胃、肺经。具有祛湿化痰，降逆止吐，消痞散结作用。主治咳嗽痰多，胸闷胀满，晕眩痞闷，恶心呕吐。生用外治痈肿等症。
【关键词】掌叶半夏植物组织培养无菌操作技术生长调节剂出苗率
一、掌叶半夏简介。掌叶半夏为多年生草本植物。块茎球形或扁球形，径约4cm。叶柄纤细柔弱，淡绿色，长45～65cm；叶片掌状分裂，小叶9～11片。肉穗花序顶生，花序柄与叶柄等长或稍长；佛焰苞淡绿色，披针形，下部筒状，长圆形，先端锐尖，长8～14cm；花单性，无花被，雌雄同株。浆果卵圆形，绿色，长4～5mm，径2～3mm，内含种子1粒。幼苗常为单叶，卵状心形；老株叶为3片小叶复叶。浆果成熟时为红色。花期为5月～7月，果期为6月～9月。
二、植物组织培养的研究意义。1.用于器官分化、形态建成、物
质代谢以及细胞遗传、病毒学等方面的研究。2.用于快速繁殖无性系，即从一个器官、组织或细胞经过多代培养而得到的后代。3.用于培养无病毒植株。植物的幼嫩部分一般尚未感染病毒。4.用于改良植物品种。5.用于植物性药物生产。
三、实验方法
1.实验材料。掌叶半夏块茎
2.研究方案。（1）比较不同激素及激素配比对愈伤组织诱导及植株再生的影响。（2）比较不同生长条件对愈伤组织诱导及植株再生的影响，选择适宜的生长发育条件。（3）建立掌叶半夏组织培养的再生系统，为工厂化生产提供技术体系。
3.药品器皿及仪器设备。试剂和药品: MS培养基，2,4-D，KT，琼脂，酒精，蒸馏水等。器皿:三角瓶，烧杯，容量瓶，量筒，移液器，滴管，试管，培养皿等。仪器设备：超净工作台，高压灭菌锅，烘箱，TD-调温万用炉，酒精灯等。其他用品：塑料筐，脱脂棉，移液枪，纱布，火柴，棉绳，牛皮纸，记号笔，标签纸，镊子等。
4.实验步骤。步骤一：培养基的配置。母液为MS培养基，蔗糖3%,琼脂1.5%,pH 5.8。分别加入：（1）：KT 1.0 mg/L + 2,4-D(0.1，0.2,0.5，1.0，2.0)mg/L；（2）：2,4-D0.2mg/L+KT(0.1，0.2, 0.5，1.0，2.0) mg/L。步骤二：实验材料的消毒灭菌。先将掌叶半夏块茎用流水冲洗干净，再用75%酒精漂洗15s，无菌水冲洗2～3次，最后用0.1%升汞消毒10～12min，无菌水冲洗4次。将实验器皿及相关用品用牛皮纸或报纸包好，灭菌。培养基用灭菌锅在0.1kPa的压力下维持121℃湿热灭菌25～30min。步骤三：接种培养。将块茎切成0.3×0.3×0.3cm3的小块,接种在固体培养基上,培养温度25±2℃,光强1500lx,每天光照12h。步骤四：炼苗与移栽。当试管苗高4～6cm时，便可在室内打开瓶口炼苗2～3天，然后取出，洗净根系上的培养基，转移到装有土和沙子（1∶1）的塑料网筛，再放置于温室中，温室湿度80%以上，温度15～20℃，经过10天左右在转移到大田栽培[3]。观察幼苗的生长情况，记录各种激素处理下的苗数。
四、实验结果与分析
1.愈伤组织的诱导与培养。任何植物细胞或组织培养体系的建立，都必须选择适宜的外植体。经研究，掌叶半夏即可用其块茎，也可采用其叶片、叶柄、珠芽、种子等作为外植体。在实际生产中，常采用块茎、叶片或珠芽为外植体。本次实验是采用块茎为外植体，切块，接种在MS培养基，附加不同激素浓度组合，在光照强度为 1500lx，每天12h，温度25±2℃等条件下培养。接种后第4天，外植体两端向上翘起，上端切口处膨大。接种后第7天，外植体从膨大处出现瘤状突起，并在过后的几天逐渐延及整个外植体边缘，形成愈伤组织，呈淡黄或浅绿色的不规则团块状。接种后第18天，愈伤组织上出现白色绒毛状物质，并有许多突起从绒毛状物质中间伸出。随后的几天，这些突起迅速生长，成为密被白色绒毛的细根。
2.再生植株的形成和形态发生部位的比较。经愈伤组织的途径形成再生苗：愈伤组织继续培养，接种后第22天，表面出现淡绿色球形突起，其顶端长出绿色芽，高约2cm，伸展出小叶。
经非愈伤组织的途径形成再生苗：有的块茎接种2～3周后，长出许多圆粒状物，但大小颜色不一致，它们逐渐长大形成绿色块状组织，并从中分化出芽。该过程没有明显的脱分化现象。
表经愈伤组织途径和非愈伤组织途径形成再生苗数的比较
由表可得：KT浓度为1.0 mg/L的块茎再生苗全部都是经过愈伤组织形式形成的；而2,4-D浓度为1.0 mg/L的块茎再生苗有两块是经非愈伤组织形式形成。总体来说，大多数再生苗都是经过愈伤组织形式形成。
3.不同激素及激素配比对愈伤组织诱导及植株再生影响的比较。选择激素KT和2,4-D，浓度分别为0.1 mg/L，0.2 mg/L，0.5 mg/L，1.0 mg/L，2.0 mg/L，共10组。根据每组块茎的生长情况进行比较，得出最佳激素浓度组合。结果如下：
表不同浓度的2, 4-D和Kt对植株再生的影响
结果表明：2,4-D和KT的浓度明显影响植株再生的数目。0.2～1.0 mg/L的2,4-D有利于再生苗的生长，0.5～2.0 mg/L的KT有利于再生苗的生长。尤其添加激素2,4-D 0.2mg/L和KT 2.0mg/L对再生植株数目提高有利。
总结：我们的实验表明,添加激素2,4-D 0.2mg/L和KT 2.0mg/L对再生植株数目提高有利。但是本次试验的再生率均偏低，因为接种过后，培养的过程中，染菌的数量太多，导致实验并不是非常成功。
参考文献：
［1］黄秀兰等，掌叶半夏、半夏、天南星的比较研究，中药材