【大花蕙兰原球茎的诱导、增殖及植株再生研究】原球茎何时转入增殖培养基

　　摘要：从大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）试管苗取材，诱导原球茎，建立植株再生体系，分析了不同激素及其浓度对原球茎诱导、增殖和植株生根的影响。结果表明，不定芽比叶片更容易诱导出原球茎；生长素ＮＡＡ对原球茎的诱导效果好于２，４－Ｄ，最适合原球茎诱导的激素组合为１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ；原球茎增殖培养基中添加１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ增殖效果较好，增殖系数可达７．９0；最适生根培养基为１／２ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖。
　　关键词：大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）；原球茎；组织培养；植株再生
　　中图分类号：Ｓ６８２．３１；Ｓ６０３．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）15－3369-03
　　Ｓｔｕｄy ｏｎ Ｐrotocorm Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｌａｎｔｌｅｔ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ
　　Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ
　　ＪＩ Ｈｕａ１，ＷＵ Ｗｅｉ－ｊｉａｎ２，ＷＵ Ｈｕａ１，ＣＨＥＮ Ｌｏｎｇ－ｑｉｎｇ１
　　（１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｏｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｗｕｈｕ Ｆａｒｍ， Ｈｕａｎｇｐｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｗｕｈａｎ ４３０３４５，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｅｘｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｒａｗｉｎｇ ｆｒｏｍ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｆｏｒ ｐrotocorm ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｋｉｎｄ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｎ ｐrotocormｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｏｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｐrotocorm ｆｒｏｍ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｅａｓｉｌｙ ｔｈａｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｆ ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ． ＮＡＡ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｆｏｒ ｐrotocorm ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｔｈａｎ ２，４－Ｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐrotocorm ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ １．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ． Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｐrotocorm ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ （７．９0） ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｄｉｎｇ １．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗａｓ １／２ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ３０ ｇ／Ｌ ｓｕｃｒｏｓｅ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ； ｐrotocorm； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
　　大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）是兰科兰属中大花型附生种类的杂交种，具有花大色艳、花多且花期长的特点，深受大众喜爱［１］。大花蕙兰的繁殖方式主要以分株为主，由于长期无性繁殖，造成带病毒植株日益增多，使兰花的品质下降；同时新品种的培育也对繁殖方式和快繁技术提出了需求。目前，兰属植物的组织快繁主要是以原球茎（Ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｙ，ＰＬＢ）为外植体诱导出愈伤组织或胚性愈伤组织，进而获得小植株［２－８］。国内对大花蕙兰组织培养［９－１６］多数是采用茎尖、侧芽为外植体，通过诱导原球茎获得小植株。本实验以大花蕙兰试管苗的不定芽和叶片为外植体，诱导和增殖原球茎，建立大花蕙兰的快速繁殖体系，以达到加大试管苗繁殖系数、简化繁殖步骤的目的。
　　１ 材料与方法
　　１．１ 材料
　　供试材料为华中农业大学园艺林学学院种质资源实验室的大花蕙兰试管苗。
　　１．２ 方法
　　１．２．１ 原球茎的诱导 从长势良好的大花蕙兰试管苗上取大小一致、高２～３ ｍｍ的不定芽及叶片作为外植体，将叶片切割成０．５～１．０ ｃｍ２的小块。外植体接种在ＭＳ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖＋６ ｇ／Ｌ琼脂培养基上。培养基中添加不同浓度的ＢＡ、ＮＡＡ或２，４－Ｄ，激素浓度组合见表１。每处理接种６个外植体，重复３次。在培养室中培养，培养温度（２５±２） ℃，光照１４ ｈ／ｄ，光照度２ ０００ ｌｘ，３０ ｄ后统计各处理原球茎的诱导率。
　　１．２．２ 原球茎的增殖 以ＭＳ为基本培养基，附加３０ ｇ／Ｌ蔗糖和６ ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ ５．５～５．８，添加不同浓度的ＢＡ和ＮＡＡ（表２）。每处理接种１５个不定芽，重复３次，培养条件同１．２．１，培养４０ ｄ后统计外植体增殖系数。
　　１．２．３ 生根培养 生根培养以１／２ＭＳ为基本培养基，附加６ ｇ／Ｌ琼脂和质量分数０．５％的活性炭，添加不同浓度的ＮＡＡ与蔗糖（表３），ｐＨ ５．５～５．８。每处理接种１５个不定芽，重复３次，培养条件同１．２．１。６０ ｄ后统计外植体的苗高、根长大于１ ｃｍ的根数目、根长和生根率。
　　１．２．４ 炼苗移栽 将生根培养得到的大花蕙兰试管苗炼苗移栽，以水苔为栽培基质，移栽前用无菌水将植株根部的培养基冲洗干净，再植入穴盘，移入遮阴棚中培养。每天向叶片喷水数次，每周浇施１～２次稀释的营养液。