农药残留快速检测步骤【农产品农药残留快速检测结果准确性影响因素分析】
目前，对农产品中药物残留的检测已经成为监控农产品质量安全状况、保障人民身体健康的重要手段和必要措施。自治区农产品质量安全快速联合检测使用的是酶抑制率法，具有检测速度快、成本低、操作简单、对检测人员技术水平要求低等特点。但是，它对生化反应条件要求严格，在检测过程中会出现各种影响因素，致使检测同一批次的蔬菜样品重现性不好，直接影响到检测结果的准确性。我们总结出部分影响因素，以提高检测结果的准确性。
1 农产品农药残留快速检测法原理
农药残留快速检测法是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫的中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性，造成神经介质乙酰胆碱(Ach)的积累，影响正常传导，致使昆虫中毒死亡这一毒理学原理对农药残留进行检测。
农药残留快速检测法只限于检测蔬菜和水果中的有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒。在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
2 农药残留快速检测中对检测结果准确性的影响因素
2.1检测试剂对检测结果的影响
农药残留快速检测要用到的试剂主要有：缓冲液(提取液)、酶(乙酰胆碱酯酶)、底物、显色剂。除缓冲液外，其他试剂在储藏过程中必须在0～5℃温度条件下，以确保酶的活性。配制缓冲液时，一定要用蒸馏水或去离子水，不可使用含有矿物质的水，否则对检测结果的准确性干扰较大。
乙酰胆碱酯酶对检测结果的影响：温度过高或过低都会降低酶的活性，而酶活性的降低会影响测量的准确性，最佳的测量温度应在20～40℃。检测室温度在20～30℃时，可以直接将乙酰胆碱酯酶在室温下培养，如果室温低于20℃，必须在25～35℃的培养箱中培养。
2.2样品前处理对检测结果的影响
样品前处理要求切成1cm见方的碎片，不能切的太小，否则有些蔬菜中大量的叶绿素溶到缓冲液中，干扰检测结果。对一些叶绿素较高的蔬菜(如菠菜、结球甘蓝等)可以采用整株蔬菜浸提，减少色素干扰；对切开后易氧化的蔬菜水果(如茄子、苹果等)也可采取整体或大块放人浸提，减少干扰；还有一些蔬菜会产生次生物质，容易产生假阳性，对这类蔬菜(如葱、韭菜、香菜等)可采取整株(体)浸提。
2.3检测仪器对检测结果的影响
检测仪器调试的影响：分光度计要经常进行校正，如连续做几个批次后，可能由于环境温度等条件的不同，要重新进行调100％和做对照，也可以每个批次都进行调100％和做对照，以确保测试结果的准确度。
比色皿的影响：比色皿良好的透光度是减少检测误差的必要条件，因此，定期用乙醇清洗比色皿，在样品检测前用擦镜纸对比色皿的两个透光面进行擦拭。使用比色皿时，两个透光面要完全平行，并垂直置于比色皿架中，以保证在测量时，入射光垂直于透光面，避免光的反射损失，保证光程固定。比色皿在使用后，立即用水冲洗干净。冲洗后不宜立即使用，应倒置在滤纸上晾干后再使用。
微量移液器的影响：微量移液器要专用，贴上标签。避免交叉使用造成实际污染；试剂从试剂瓶中吸出后，不能再放回瓶中，防止试剂污染。
2.4检测员的操作对检测结果的影响
样品在加入缓冲液(提取液)后，需要震荡摇匀1～2分钟，但是震荡不能太剧烈，否则会使样品摇烂，使缓冲液中的蔬菜色素增多，影响分光光度计的测量。
检测员在使用移液器，在吸取时轻按至第一停点，将吸头没人试剂液面下2～3mm，轻缓松开按钮回原点，慢慢提出吸头并在容器壁上停靠一下，以去除多余试剂，轻按按钮至第一停点，排出液体，稍停片刻按至第二停点，排空吸头，以确保液体准确性。加试剂时，移液器要保持垂直；吸头有试剂时，移液器不能平放或者倒置，避免污染移液器，进而污染其他试剂和样品。
待测样品加入底物后，应该马上摇匀，放入仪器检测，否则影响结果准确性。比如在白菜的测试中，立刻放入检测的抑制率是18.6％，在延迟1分钟后放入检测抑制率78.4％，可见，加试剂后放入检测的速度快慢对检测结果准确性影响很大。同时，要确保同一组样品放入时间和对照放入的时间一致，这个直接影响到检测结果。
2.5试验参数准确性对检测结果的影响
空白对照吸光度变化△A0值：样品的检测结果是通过抑制率来反应，抑制率(％)=[(△A0－△Ax)／△A0]×100，通过公式可以看出，检测结果的准确性和△A0值准确度有密切关系。吸光度变化△A0值一般由于试剂厂商、环境温度条件、测试仪器、酶的活性等条件的不同而有变化，一般认为△A0在0.3～0.9是正常的。当△A00)0.9时，说明乙酰胆碱酯酶对底物的水解反应速度过快，这种情况可以把测试时间缩短为2～3分钟，以确保对照的△A0的准确性。
测试时间对结果的影响：乙酰胆碱酯酶对底物的水解反应是一个渐进的过程，一般而言，只要时间足够长，酶就能将底物完全水解，从而使吸光度达到最大值。样品的吸光度值随着反应时间逐渐增加，在初始阶段吸光度值增加较快，反应5分钟时，吸光度就达到80％左右。说明这段水解反应速度快，在后期，吸光度值变化缓慢，9分钟后吸光度值基本不变，表明酶的水解反应基本结束，吸光度达到了最大值。宜采用反应初期3～5分钟时吸光度的变化量来计算酶抑制率，同时做吸光度值的空白对照，提高测量的准确性。