阿片受体 _阿片受体激活诱导心肌细胞增殖的信号转导途径
δ阿片受体激活诱导心肌细胞增殖的信号转导途径
赵 敏,王洪新,崔 蕾
(辽宁医学院药理学教研室,辽宁锦州 121001)
摘要:目的 研究δ阿片受体激活剂D2丙(2)2D2亮(5)脑啡肽(DADLE)诱导心肌细胞增殖的可能信号途径。方法 体外培养乳大鼠心肌细胞,采用结晶紫法和[H]TdR检测心肌细胞的增殖;-平。结果 磷酸化,,δ-1
吲哚10μmol・L,蛋白激酶C(PKC)特异性抑制剂
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星形孢菌素1μmol・L和ERK特异性抑制剂
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受体和其他G蛋白耦联受体可激活细胞外信号调节
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(2ERK)。(mitogen2activa2)家族中的一员
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,参与细
资料也表明,ERK激活可使培养的心肌细
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胞增殖;内源性阿片肽在低浓度可作用于δ阿片受体,通过MAPK2ERK通路对培养的PC12细胞有保护作用
[9]
。ERK的2个亚型,ERK1和ERK2均在新生
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的哺乳动物的心肌细胞中存在。ERK1/2传导通路是。因此,ERK通路
对心肌细胞的增殖作用很关键,但δ阿片受体激活对MAPK家族最基本的信号通路
U012610nmol・L明显降低ERK磷酸化水平,抑制DADLE的促心肌细胞增殖作用。结论 DADLE可
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能通过δ阿片受体活化PKC,进而激活有丝分裂原激活蛋白激酶ERK通路诱导心肌细胞增殖。关键词:受体,阿片样,δ;心肌;细胞,培养的;细胞增殖;细胞外信号调节激酶中图分类号:R962文献标识码:A
文章编号:100023002(2007)0520377204
阿片受体在中枢水平的研究较多,对外周阿片受体的研究近年来才逐渐起步。已证实心肌细胞本身可以产生和释放阿片肽,而且已证实大鼠心
δ和μ3种阿片受体。也已证肌组织上主要存在κ、
实,δ阿片受体激动剂D2丙(2)2D2亮(5)脑啡肽([D2Ala,D2Leu]2enkephalin,DADLE)对培养的
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培养的心肌细胞生长的信号转导机制尚未见报道。
本实验采用体外培养的乳大鼠心肌细胞,研究δ阿片受体激活剂DADLE诱导心肌细胞增殖中ERK的作用,并分析其作用机制。
1 材料和方法
1.1 动物、药品与试剂
出生2～3d的SD乳大鼠,雌雄不拘,由锦州医学院实验动物中心提供,动物许可证号:SCXK(辽)200320007。DADLE,纳曲吲哚(naltrindole),1,42二
氨基22,32氰基21,42双(22氨基苯基硫代)丁二烯,U0126〔1,42diamino22,32dicyano21,42bis(o2amino2phenylmercapto)butadiene〕,星形孢菌素(staurospo2rine),十二烷基硫酸钠(SDS),低糖培养基DMEM
鸡胚心肌细胞有正性肌力作用胞可出现增殖现象
[4]
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。培养的心肌细。据报道,阿片
均购自美国Sigma公司;小牛血清为杭州四季青生物材料研究所产品;[H]TdR为上海原子核研究所产品;其他试剂均为分析纯。
1.2 乳大鼠心肌细胞原代培养、分组及给药方法
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,本室的研究也表明,DADLE
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对培养的心肌细胞有增殖作用
收稿日期:2006209214 接受日期:2007202212 基金项目:辽宁省自然科学基金(20042170)
作者简介:赵 敏(1979-),女,山东省滨州市人,药理学硕士,主要从事心血管药理学研究;王洪新(1964-),男,辽宁省锦州市人,教授,医学博士,主要从事心血管药理学研究。 3联系作者 E2mail:Jyhxwang@163.com Tel:
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在无菌条件下,开胸取出心脏,用D2Hanks液洗涤3次后,剪成1mm小块,加入0.8g・L胰蛋白酶消化细胞,将消化完毕的细胞置入含有10%小牛血清及90%DMEM培养基的100mL大培养瓶中,置于通以5%CO2的CO2孵育箱中,37℃静置培养1.5～2h,根据心肌细胞及非心肌细胞(主要为成纤
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维细胞)贴壁速度的不同,及心肌细胞搏动,
可区分获得心肌细胞。非心肌细胞贴壁的速度较快,首
先附在瓶底,而心肌细胞仍存在于细胞悬液中,将细
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胞悬液吸出,吹打均匀后以5×10L密度接种于24孔板中,每孔1mL,置入CO2孵育箱中培养。培养基的组成如下:15%小牛血清,84%DMEM培养基
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及1%双抗液(含100kU・L青霉素,100mg・L链霉素)。常规培养心肌细胞2～3d后,更换含0.4%小牛血清的培养基,以减少血清成分对实验结果的影响。再培养48h后分组,分别给予DADLE、DADLE+纳曲吲哚、DADLE+孢菌素。48h1.3 [12[11]
漂洗后加显色剂氯化硝基四氮唑蓝(nitrotetrazolium
bluechloride,NBT)5min。显影条带经1200Pro型图像扫描仪扫描,CAMIAS2008图像分析系统处理,根据积分吸光度值对比分析条带的强弱。以磷酸化ERK/ERK比值表示磷酸化水平。1.6 数据处理实验数据均以x