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化学发光法检测梅毒特异性抗体在临床筛查试验中的应用评价:梅毒特异性抗体阳性3.077

发布时间:2019-07-19 10:07:32 影响了:

・780・・

论著・

化学发光法检测梅毒特异性抗体在临床

筛查试验中的应用评价

张晓红 张倩 周学红 耿红艳 刘向祎

  【摘要】 目的 对化学发光法检测梅毒螺旋体(TP)特异性抗体在临床筛查试验中的特异性进行评价。方法 对北京同仁医院检验科梅毒螺旋体特异性抗体的检测结果进行回顾性分析。采用雅培化学发光法梅毒特异性抗体检测试剂对2011年8月至2012年7月期间65774份术前检查患者血清标本进行检测,初筛阳性标本附加甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),并采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行复检。对化学发光法与TPPA试验检测结果不一致的标本采用免疫印迹法(WB)进行确证,经SPSS17.0软件对结果进行统计分析。结果 65774份术前检查患者血清标本中,共筛检出940份抗-TP抗体阳性标本,经TPPA试验复检后,843份为阳性,97份为阴性;TRUST试验检测结果为阳性330份,阴性610份。97份TPPA试验检测结果为阴性的血清标本中,经WB试验确证,18份为阳性,7份为不确定,72份为阴性。结论 化学发光法梅毒特异性抗体检测试剂的特异性为99.89%,TPPA试验可作为常规临床实验室中梅毒特异性抗体筛查试验的一种有效的补充试验。必要时,可选用免疫印迹法进行确证。(中华检验医学杂志,2014,37:780-783)

【关键词】 密螺旋体,苍白; 抗体,细菌; 化学发光测定法; 免疫检测; 凝集试验; 梅毒血清诊断

Evaluationofthechemiluminescenceimmunoassayfordiagnosisofsyphilisintheclinicalscreeningtest ZhangXiaohong,ZhangQian,ZhouXuehong,GengHongyan,LiuXiangyi.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingTongrenHospital,CapitalUniversityMedical,Beijing100730,ChinaCorrespondingauthor:LiuXiangyi,Email:13693328516@163.com【Abstract】 Objective ToevaluatethespecificityofArchitectchemiluminescenceimmunoassay(CLIA)fordiagnosisofsyphilisintheclinicalscreeningtest.Methods 65774syphilisspecificantibodyresultsintheBeijingTongrenHospitalwereretrospectivelyanalyzed.Inthisstudy,ArchitectCLIAfordiagnosisofsyphiliswasusedasascreeningtestforthepre-operativepatientsfromAugust2011toJuly2012.Alltherepeatedlyreactivesamplesweretestedbythetolulizedredunheatedserumtest(TRUST)andTreponemapallidumparticleagglutination(TPPA)assay.Sampleswithwithdiscordantresultswereverifiedbywesternblot(WB)Finally,alltheresultswerestatisticallyanalyzedbysoftwareSPSS17.0.ResultsAmong65774samples,940(1.43%)werefoundtoberepeatedlyreactiveusingtheArchitectCLIA.Ofthesesera,330(35.11%)werereactiveand610(64.89%)werenonreactivebyTRUST.BecauseaTRUSTtiterof1:1wasnotalwayssufficienttoconfirmaTPPAreactiveresult,allthesampleswithCLIAreactiveresultswerefinallyperformedbyTPPAassays.Theresultsshowedthat843(89.68%)werepositiveand97(10.32%)werenegative.AfterarbitratedbytheWB,outof97TPPAnegativesera,18(18.56%)werepositive;7(7.22%)wereindeterminateand72(74.23%)werenegative.ConclusionsThespecificityofArchitectCLIAfordiagnosisofsyphiliswas99.89%.TheresultsshowedthatconfirmationbyTPPAonserawithscreeningtestforsyphilisbyArchitectCLIAeffectivelydecreasedthefalse-positiveresultsandcouldbesuitableforaroutinesupplementaryforsyphilis.However,ifnecessary,theWBshouldbefurtherutilized.(ChinJLabMed,2014,37:780-783)

【Keywords】 Treponemapallidum; Antibodies,bacterial; Chemiluminescenmeasurements; Immunoassay; Agglutinationtests; Syphilisserodiagnosis

DOI:10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.10.015

作者单位:100730首都医科大学附属北京同仁医院检验科通信作者:刘向祎,电子信箱:13693328516@163.com

・781・

  梅毒是由苍白密螺旋体的亚种即梅毒螺旋体引起的性传播疾病,通过人类黏膜或有破损的皮肤直接接触患者感染性病灶而传播,可持续几年甚至是

[1]

几十年,引起全身性的损害及病变。近年来,我国梅毒的患病率呈逐渐上升的趋势,尤其是在深圳、

[2]

广州、上海等地区。另外,梅毒还可以通过输血传播,目前已在国内外作为常规术前检查项目。国内外临床实验室多采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)方法作

[4]

为梅毒血清学诊断的初筛检测,但由于ELISA试[3]

标本附加TRUST试验,并采用TPPA试验进行复检。TRUST试剂购自北京万泰生物药业股份有限公司;TPPA试剂购自日本富士株式会社。

对CLIA与TPPA试验检测结果不一致的标本采用WB进行确证。免疫印迹法检测梅毒螺旋体Tp15、Tp17、Tp45和Tp47蛋白的IgG抗体。如果检测结果至少出现两条条带的为阳性,如果只有一条判定为不确定,没有条带判定为阴性。WB试剂购自北京万泰生物药业股份有限公司。上述所有操作均按仪器和试剂盒说明书进行。

验操作时间较长,不适合临床急诊标本。美国雅培公司推出基于化学发光免疫分析技术(chemiluminescentimmunoassay,CLIA)为原理测定血清梅毒特异性抗体的方法,灵敏度和特异度显著提高CLIA,[5]

捷,每个测试仅需也具有明显优势并且对于抗体效价较低的弱阳性血清标本,;另外,CLIA检测方便快29min,所以CLIA梅毒特异性抗体检测已在国内部分临床实验室大量应用CLIA。然而,ELISA梅毒特异性抗体检测作为一种筛查试验斑狼疮试验相似、类风湿性关节炎,也存在一些假阳性、猩红热等疾病的影响,如受结核,、与[6]

,尤其是在梅毒低流行地区,假阳性的发生率更高。梅毒particle螺旋体明胶凝集试验(treponemapallidum制备成抗原来检测血清中梅毒特异性抗体的方法agglutination,TPPA)是应用梅毒螺旋体毒株,其特异性好、灵敏度高。因此,本研究以TPPA试验为参比方法,并对CLIA与TPPA试验检测结果不一致的标本采用免疫印迹法(Westernblot,WB)进行确证,评价雅培CLIA梅毒特异性抗体检测试剂的特异性,以提高梅毒血清学诊断的准确性。

对象与方法

一、对象

2011年8月1日至2012年7月31日期间常规术前检查患者共65774例,其中男32226例,女33548例,年龄0~94岁。所有标本采集均为空腹条件下取静脉血3ml,离心1409×g,10min。

二、仪器与试剂

所有患者血清标本均采用美国雅培全自动免疫分析仪I2000SR和雅培CLIA梅毒特异性抗体检测试剂进行检测,质控品和定标液均购自雅培公司。判断标准:化学发光法S/CO值≥1.00为阳性,<1.00为阴性。所有阳性标本采用同种试剂进行复检后仍为阳性者判断为初筛试验阳性。初筛阳性

三、统计学分析

以上梅毒抗体的4种检测方法均为观察性指标,数据类型为计数资料。采用SPSS17.0软件对所有结果进行统计学分析,2种检测方法间比较采

用χ2

检验,P<0.05为差异具有统计学意义。

一、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)结果2011年8月至2012年7月期间本院65774份术前检查患者血清标本中,共筛检出940份初筛试验阳性标本。在940例初筛阳性患者中,484例为男性,其中198例TRUST试验阳性,占40.91%;456例为女性,其中132例TRUST试验阳性,占28.95%。

二、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)结果

940份初筛阳性标本经TPPA试验复检后,843份为阳性,97份为阴性,经统计学分析后,特异性为99.85%(95%可信区间为99.83%~99.87%),阳性预测值为89.68%(95%可信区间为87.87%~91.21%)。

TRUST三、CLIA梅毒特异性抗体检测S/CO值与TRUST940、TPPA份初试验结果分析

筛阳性患者血清标本试验阳性标本中、TPPA试验结果分析见表,S/CO值≥10.00时1。100%843S/CO份为阳性TPPA值与。其中,S/CO值为15.00~30.00之间的373份,占44.25%;S/CO值为30.00~47.00之间的146份,占17.32%,最大S/CO值为46.10。在S/CO值<10.00的血清标本中,随着S/CO值越来越小,TPPA试验阳性比例越来越低。其中,S/CO值为1.00~3.00之间的血清标本中共检测到4份TPPA试验阳性,最小S/CO为1.95。

97份TPPA试验阴性标本中,S/CO值为1.00~3.00之间的45份,占46.39%;S/CO值为3.00~

・782・表1 CLIA阳性标本S/CO值与TRUST

及TPPA试验结果

S/CO值1.00~3.003.00~5.005.00~7.001∶1027≥1∶2012TRUST

(-)442541∶1012≥1∶2000TRUST

(-)45358为1.31%,表明我们国家仍属于梅毒低流行地区。同时,我们的结果表明,雅培CLIA梅毒特异性抗体检测试剂具有高度的特异性(99.89%),与国外研

[7]

究结果一致。

940份初筛阳性患者血清标本中,330份为TRUST试验阳性。其中,有5份标本TRUST试验阳7.00~10.001746820410.00~15.0021159200015.00~30.004810022000030.00~47.00

32

76

38

5.00之间的36份,占37.11%。另外,S/CO值为7.00~10.00之间的仍有6份,占6.19%;最大S/CO试验阴性的比例越大值为9.05。这些结果表明S/CO值越低,TPPA由表TRUSTTRUST1可见试验操作过程中。

,在TPPA试,最高稀释度至1∶256。增加,TRUST试验阳性滴度325≥1∶份2,的比例明显增加阴性验阳518性份的;血随着清标本中,。STPPA/CO值试验阴性的血清标本中,TRUST试验阳性5份,均为原血清阳性,阴性92份。TRUST试验滴度≥1∶2的血清标本中无TPPA试验阴性。

四、WB试验结果

97份TPPA试验阴性的标本中,经WB试验确证,18份为阳性,7份为不确定,72份为阴性。在5份TRUST试验阳性而TPPA试验阴性的血清标本中,仅有1份为WB试验阳性,4份为WB试验阴性;其余92份TRUST试验阴性且TPPA试验阴性的血清标本中,17份为阳性,7份为不确定,68份为阴性。本研究中,不确定标本不进入计算,经统计学分析,化学发光法梅毒特异性抗体检测试剂的特异性为99.89%(95%可信区间为99.87%~99.91%)。另外,此结果还表明术前检查患者中梅毒感染率为1.31%(861/65767)。

血清学检测梅毒特异性抗体是目前国内外诊断梅毒的主要方法。因此,选择灵敏度高及特异性强的试验方法有助于梅毒的诊治。化学发光法是近年来随着梅毒螺旋体基因工程抗原的研制成功而建立的检测梅毒特异性抗体的方法。本研究在65774例术前检查患者中,共筛检出940例临床可疑梅毒患者;经TPPA试验复检及WB试验确证后,861例为梅毒感染阳性,所以术前检查患者中梅毒感染率

性而TPPA试验为阴性,再次证明TRUST试验较低

稀释度阳性时TPPA试验并不一定为阳性[8]

。另外,TRUST试验阳性稀释度越高,TPPA试验阳性的可能性越大;在所有初筛试验阳性标本中,TRUST试验阳性稀释度≥2时,TPPA试验均阳性。

假阳性一直是梅毒血清学诊断中困扰临床医生的一个重要问题,随着雅培CLIA梅毒特异性抗体检测试剂在国内外的广泛应用,人们对它在检测过程中引CLIA于以前的研究与起的假TPPA[9]

试验结果不一致的占阳性越来越关注。我们的结果中

,这可能是由于人种10.、疾病发病率32%,稍低

不同等因素的影响。另外,97例TPPA试验阴性患者中,老年人(≥60岁)居多,这与国内文献报道结

果一致[10]

。老年患者的血清标本中,可能存在一些干扰因素,如类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、恶性肿瘤

等,易产生假阳性[11-12]

另外,我们的研究结果提示,S/CO值为4.50时并不意味着TPPA试验一定为阳性,S/CO值为2.50时并不意味着TPPA试验一定为阴性。2012年8月

杜静等[13]

CO研究报道,雅培CLIA梅毒特异性抗体S研究中/CO值设为值S≥5.5./CO085085时,特异性达到100%;也就是说S/值≥5.时,085没有假阳性时,共筛检出。然而16,在我们的例假阳性标本,占16.49%;这可能与例数有限、地域差异等有关。我们的研究中标本量(65774份)及阳性标本数量(940份)远较杜静研究中量大。而且,在本研究中TPPA试验阳性标本中S/CO值最小为1.95,所以我们提出建议,对CLIA初筛阳性的血清标本均应通过TPPA试验进行复检,尤其是S/CO值

<5.00时[14]

。本研究还发现,CLIA梅毒特异性抗体检测阳性,用快速金标法复检也为阳性时,仍有少数标本TPPA试验检测结果为阴性。

非特异性抗体检测如TRUST试验在一期和既往感染的梅毒患者血清中敏感度较低,不适合作为初筛试验;但可用于梅毒疗效观察、随访和复发的诊断[15]

TRUST。试验结果为阴性时更需要通过所以,雅培CLIA梅毒特异性抗体检测阳性TPPA试验进

・783・

行复检。TPPA试验具有特异性强、灵敏度高的优点,然而由于TPPA试验的检测需多步稀释,操作较为繁琐,而且耗时较长,结果依赖肉眼判断且不易保存,对操作人员的水平要求也较高,所以难以在普通医疗单位作为初筛试验。梅毒特异性抗体WB是通过电泳转移硝酸纤维素膜抗原条带上含有梅毒螺旋体的各种成分来确认是否有梅毒感染,它结合了免疫学和分子生物学的特点,敏感度高,特异度强,是目前国际公认的梅毒确证方法,然而,试剂成本太

[16]

高,极大地限制了其在临床实验室中的应用。在我们的研究中,97份CLIA与TPPA试验结果不一致的标本中,仅有18份(18.56%)经WB试验鉴定为阳性,表明TPPA试验在普通临床实验室中可作为初筛试验的一种有效的补充试验;这对一般的医疗机构来说,从时间、经济、准确度等各方面无疑都是不错的选择,并可有效地减免一些医疗纠纷。

因此,雅培化学发光法梅毒特异性抗体检测试剂具有高度的灵敏度和特异度,非常适合大批量样本的筛查。然而,针对化学发光法作为初筛试验过程中产生的假阳性,有必要同时开展TPPA试验作为一种有效的补充;条件允许时,可选用WB进行确证,以提高梅毒检测的准确性。

[15][16][4]

[5]

[6]

[7]

[8]

[9][10][11]

[12]

[13]

[14]

[1]SinghAE,RomanowskiB.Syphilis:reviewwithemphasison

clinical,epidemiologic,andsomebiologicfeatures[J].ClinMicrobiolRev,1999,12:187-209.

[2]张伟东,姚建义.1998—2007年中国梅毒流行病学特征分析

[J].疾病监测,2009,24:830-831.

[3]LiuJ,HuangY,WangJ,etal.Theincreasingprevalenceof

serologicmarkersforsyphilisamongChineseblooddonorsin2008

through2010duringasyphilisepidemic[J].Transfusion,2012,52:1741-1749.

ColeMJ,PerryKR,ParryJV.Comparativeevaluationof15serologicalassaysforthedetectionofsyphilisinfection[J].EurJClinMicrobiolInfectDis,2007,26:705-713.

KnightCS,CrumMA,HardyRW.EvaluationoftheLIAISONchemiluminescenceimmunoassayfordiagnosisofsyphilis[J].ClinVaccineImmunol,2007,14:710-713.

金月兰,顾伟鸣,杨阳,等.化学发光免疫分析法与梅毒螺旋体明胶凝集试验检测梅毒螺旋体特异性抗体的比较[J].中华检验医学杂志,2008,31:1229-1230.

YoungH,PrydeJ,DuncanL,etal.TheArchitectSyphilisassayforantibodiestoTreponemapallidum:anautomatedscreeningassaywithhighsensitivityinprimarysyphilis[J].SexTransmInfect,2009,85:19-23.Yen-LiebermanB,DanielJ,MeansC,etal.Identificationoffalse-positivesyphilisantibodyresultsusingasemiquantitativealgorithm[J].ClinVaccineImmunol,2011,18:1038-1040.LipinskyD,SchreiberL,KopelV,etal.Validationofreversesequencescreeningforsyphilis[J].JClinMicrobiol,50:1501.武建国.老年人抗梅毒螺旋体抗体测定假阳性率偏高[J].临床检验杂志,2006,24:241-243.

IsmailAA.Aradicalapproachisneededtoeliminateinterferencefromendogenousantibodiesinimmunoassays[J].ClinChem,2005,51:25-26.

AugenbraunM,FrenchA,GlesbyM,etal.HepatitisCvirusinfectionandbiologicalfalse-positivesyphilistests[J].SexTransmInfect,2010,86:97-98.

杜静,张泽芸,周薇,等.化学发光微粒子免疫分析法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用与评价[J].广东医学,2012,8:1100-1102.

YoshiokaN,DequchiM,KaqitaM,etal.EvaluationofachemiluminescentmicroparticleimmunoassayfordeterminationofTreponemapallidumantibodies[J].ClinLab,2007,53:597-603.

谭延国,张岩,李琦,等.微粒子化学发光法检测梅毒抗体的临床应用[J].中华检验医学杂志,2009,32:90-91.

NovikovAI,DolgikhTI,NovikovIuA.Westernblotasaconfirmingtestinthelaboratorydiagnosisofsyphilis[J].KlinLabDiagn,2011,8:44-45.

(收稿日期:2014-01-18)

(本文编辑:唐栋)

时讯・

第十二届中国检验医学暨输血仪器与试剂博览会报名

  由全国卫生产业企业管理协会医学检验产业分会(CACLP/CAIVD)主办的第十二届中国检验医学暨输血仪器与试剂博览会拟于2015年3月18至20日(16至17日布展)在福建省厦门国际会展中心举行。届时,由上海博德会展会务有限公司举办的第二届博德中国体外诊断行业论坛将于2015年3月17日在厦门国际会展中心多功能会议厅隆重召开。依托第十二届中国检验医学暨输血仪器与试剂

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全国卫生产业企业管理协会医学检验产业分会

化学发光法检测梅毒特异性抗体在临床筛查试验中的应用评价

作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):

张晓红, 张倩, 周学红, 耿红艳, 刘向祎, Zhang Xiaohong, Zhang Qian, Zhou Xuehong , Geng Hongyan, Liu Xiangyi

100730,首都医科大学附属北京同仁医院检验科中华检验医学杂志

Chinese Journal of Laboratory Medicine2014(10)

参考文献(16条)

1. Singh AE;Romanowski B Syphilis:review with emphasis on clinical, epidemiologic, and some biologicfeatures 1999

2. 张伟东;姚建义 1998-2007年中国梅毒流行病学特征分析 2009

3. Liu J;Huang Y;Wang J The increasing prevalence of serologic markers for syphilis among Chineseblood donors in 2008 through 2010 during a syphilis epidemic 2012

4. Cole MJ;Perry KR;Parry JV Comparative evaluation of 15 serological assays for the detection ofsyphilis infection 2007

5. Knight CS;Crum MA;Hardy RW Evaluation of the LIAISON chemiluminescence immunoassay for diagnosisof syphilis 2007

6. 金月兰;顾伟鸣;杨阳 化学发光免疫分析法与梅毒螺旋体明胶凝集试验检测梅毒螺旋体特异性抗体的比较 20087. Young H;Pryde J;Duncan L The Architect Syphilis assay for antibodies to Treponema pallidum:anautomated screening assay with high sensitivity in primary syphilis 2009

8. Yen-Lieberman B;Daniel J;Means C Identification of false-positive syphilis antibody results usinga semiquantitative algorithm 2011

9. Lipinsky D;Schreiber L;Kopel V Validation of reverse sequence screening for syphilis10. 武建国 老年人抗梅毒螺旋体抗体测定假阳性率偏高 2006

11. Ismail AA A radical approach is needed to eliminate interference from endogenous antibodies inimmunoassays 2005

12. Augenpaun M;French A;Glesby M Hepatitis C virus infection and biological false-positive syphilistests 2010

13. 杜静;张泽芸;周薇 化学发光微粒子免疫分析法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用与评价 2012

14. Yoshioka N;Dequchi M;Kaqita M Evaluation of a chemiluminescent microparticle immunoassay fordetermination of Treponema pallidum antibodies 2007

15. 谭延国;张岩;李琦 微粒子化学发光法检测梅毒抗体的临床应用 2009

16. Novikov AI;Dolgikh TI;Novikov IuA Western blot as a confirming test in the laboratory diagnosisof syphilis 2011

引用本文格式:张晓红. 张倩. 周学红. 耿红艳. 刘向祎. Zhang Xiaohong. Zhang Qian. Zhou Xuehong. Geng Hongyan. Liu Xiangyi 化学发光法检测梅毒特异性抗体在临床筛查试验中的应用评价[期刊论文]-中华检验医学杂志

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