[球孢白僵菌菌株Ｂｂ－２孢子侵染力和代谢产物毒力]球孢白僵菌孢子
摘要：利用球孢白僵菌菌株Ｂｂ－２（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ Ｂｂ－２）活体孢子和代谢产物对２龄小菜蛾（Ｐｌｕｔeｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）幼虫和桃蚜（Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ）进行毒力测定。结果表明，菌株Ｂｂ－２在１．１×１０７、１．１×１０８、１．１×１０９个孢子／ｍＬ ３个浓度下，对２龄小菜蛾幼虫和桃蚜均表现出较高的侵染力。在高浓度（１．１×１０９个孢子／ｍＬ）条件下，２龄小菜蛾幼虫的４ ｄ累计死亡率为７５.0％，桃蚜的４ ｄ累计死亡率为９２．５％。在低浓度（１．１×１０７个孢子／ｍＬ）条件下，２龄小菜蛾幼虫的４ ｄ累计死亡率为３６．７％，桃蚜的４ ｄ累计死亡率为４７．７％。菌株Ｂｂ－２发酵液对２龄小菜蛾幼虫和桃蚜均有一定的活性，且对桃蚜的活性明显高于对小菜蛾的活性。
关键词：球孢白僵菌菌株Ｂｂ－２（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ Ｂｂ－２）；侵染力；代谢产物
中图分类号：Ｓ４７６．１２；Ｓ４３６．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）15－3237-03
Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆ Ｓｐｏｒｅｓ ａｎｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｆｉｌｔｒａｔｅｓ ｏｆ Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ Ｂｂ－２
ＧＡＯ Ｐｉｎｇ，ＨＵ Ｑｉａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｐｅｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０１６１， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆ Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ ｓｔｒａｉｎ Ｂｂ－２ ｔｏ Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ ａｎｄ Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ ｗａｓ ａｓｓａｙｅｄ ｂｙ ｉｔｓ ａｌｉｖｅ ｓｐｏｒｅｓ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｉｌｔｒａｔｅｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｂｂ－２ ｗａｓ ｈｉｇｈｌｙ ｖｉｒｕｌｅｎｔ ａｔ ｔｈｒｅｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｉｅｓ， １．１×１０７，１．１×１０８，１．１×１０９ ind./mL． Ａｔ ｈｉｇｈ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ １．１×１０９ ind./mL， ｔｈｅ ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｏｆ Ｐ. ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ ｗａｓ ７５.0％； ａｎｄ of Ｍ. ｐｅｒｓｉｃａｅ ｗａｓ ９２．５％ in 4 d． Ａｔ ｌｏｗ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ， ｔｈｅ ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗａｓ ３６．７％； ａｎｄ of Ｍ. ｐｅｒｓｉｃａｅ ｗａｓ ４７．７％． Ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｉｌｔｒａｔｅs ｏｆ ｓｔｒａｉｎ Ｂｂ－２ ｗｅｒｅ also with anti-pest active； ａｎｄ ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｍ． ｐｅｒｓｉｃａｅ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ Ｐ． ｘｙｌｏｓｔｅｌｌｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ Ｂｂ－２； ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｉｌｔｒａｔｅｓ
小菜蛾（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）和桃蚜（Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ）是世界性重要害虫，由于发生广、为害重且极易对化学农药产生抗性，对蔬菜生产造成很大的威胁。因此，微生物杀虫剂的开发成为国内外研究的热点，昆虫病原真菌也由于其独特的杀虫作用而日益受到关注［１］。
白僵菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）是当前世界上研究和应用最广泛的一种昆虫病原真菌，在自然界的分布极为广泛，寄主约有１５个目的７００多种昆虫［２］，在国外已被成功开发成为多种剂型农药并登记注册，在害虫的可持续治理中具有重要意义［３，４］。１９９５年美国相继注册登记了２个真菌杀虫剂系列产品，1个是球孢白僵菌，另1个是玫烟色拟青霉，用于防治蚜虫、叶蝉等刺吸式害虫，标志着防治刺吸式害虫的真菌杀虫剂产业化的开始［５］。而我国应用丝孢类虫生真菌防治刺吸式害虫的研究尚处于起步阶段。因而，加快针对刺吸式害虫的真菌杀虫剂的开发，是我们面临的重要机遇和挑战。本试验对分离于桃蚜体上的球孢白僵菌Ｂｂ－２菌株对小菜蛾幼虫和桃蚜的毒力进行了测定，为进一步研究和开发利用该菌株奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 供试昆虫与菌株
供试昆虫：小菜蛾（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）２龄幼虫，由沈阳化工研究院提供，并由本实验室继代饲养；桃蚜（Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ）无翅成蚜，采自沈阳农业大学园艺学院基地温室，采用盆栽白菜苗室内饲养。
供试菌株：球孢白僵菌Ｂｂ－２菌株，原始寄主为桃蚜，于２００６年１０月采自沈阳农业大学园艺学院实验地，经室内保湿，分离纯化获得。
１．２ 培养基
ＳＤＡＹ培养基（成分：葡萄糖２０ ｇ、蛋白胨１０ ｇ、酵母浸膏１０ ｇ、琼脂２０ ｇ、蒸馏水１ ０００ ｍＬ。）
查氏培养基（成分：蔗糖３０ ｇ、ＮａＮＯ３ ２ ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．５ ｇ、蛋白胨５ ｇ、ＫＣｌ ０．５ ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １ ｇ、ＦｅＳＯ４ ０．０１ ｇ、蒸馏水１ ０００ ｍＬ）
１．３ 毒力测定
１．３．１ 菌株Ｂｂ－２孢子侵染力测定
１）菌液的制备。将菌种Ｂｂ－２接种于ＳＤＡＹ培养基上，在２５ ℃培养１５ ｄ。用含０．１％Ｔｗｅｅｎ－８０的无菌水分两次加入试管中冲洗，用接种针轻轻刮下培养斜面上的孢子，倒入灭过菌的小烧杯中，然后用无菌水倍比稀释配成１．１×１０７、１．１×１０８、１．１×１０９个孢子／ｍＬ的孢子悬浮液。
２）小菜蛾接种方法。用打孔器将新鲜的白菜叶片打成直径５ ｃｍ左右的圆片，置于底部垫有滤纸片的培养皿中，每皿３片。采用浸渍法将２龄小菜蛾幼虫处理后接入保湿的培养皿中，每皿３０头。每个处理设３个重复，以浸渍含有０．１％ Ｔｗｅｅｎ－８０无菌水的处理作对照。处理后放入恒温培养箱在（２５±１） ℃、相对湿度（８５±５）％条件下培养，每天换一次叶片，每日记录死、活虫数，９６ ｈ后统计校正死亡率。虫死后保湿培养，观察菌丝生长及产孢情况。并挑片镜检确认是否为白僵菌感染致死［６-8］。