一种高特异性的改良降落ＰＣＲ（英文）:特异性英文
发布时间：2019-02-16 04:15:52 影响了： 人
摘 要：为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性，设计了一种改良的降落PCR程序，并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验．自盐藻Dunaliella bardawiJ中提取基因组DNA作为PCR模板，使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶，运用普通PCR和降落PCR程序，扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列，并电泳比较PCR扩增产物的特异性．结果显示，使用普通Taq酶PCR，普通PCR程序产生2印bp，500bp和1272bp长的三条带，而TD―PCR程序仅克隆出1272bp的特异带；利用高保真的PfuDNA聚合酶作PCR，在TD―PCR泳道中仅有1 272bp一条带，而普通PCR除了1272bp的特异带外，还出现一条500bp的非特异带．无论使用普通Taq酶或高保真酶Pfu，改良的降落PCR程序均明显提高PCR的特异性，类似的降落PCR程序可望用于克隆用普通PCR难以克隆的基因片段，或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性．
关键词：降落PCR；PCR特异性；Pfu DNA聚合酶
中图分类号：Q781
文献标识码：A
文章编号：1007―7847(2002)04-0314-04 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文