采用内标法测定天然产物中某两成分【HPLC/DAD内标法测定纺织品中芦荟成分的含量】
摘要：采用内标法定量，建立高效液相色谱二极管阵列检测器测定纺织品中芦荟成分含量的方法。本方法操作简单、准确、可靠、重复性好，可作为纺织品质量控制的参考方法。 关键词：芦荟；纺织品；HPLC/DAD；内标法
纺织品是人类生活的必需品，开发以舒适、清洁、健康为主的功能性纺织品已经成为21世纪主题。芦荟作为一种纯天然的具有多种特殊功效的植物，已应用到纺织品的后整理技术中[1-3]。经芦荟整理的纺织品具有保湿、护肤、杀菌、抗菌的功效，属于高档次产品[4]。但是由于检测方法和相关标准的缺乏，假冒伪劣产品横行，严重损害了消费者的利益。建立纺织品中芦荟成分含量的检测方法，对功能性纺织品的质量监管有着重大的意义。芦荟纺织品中主要功效成分有芦荟苷、芦荟大黄素和大黄酚[5-6]。本文以它们为研究对象，选用1,8-二羟基蒽醌为内标物，采用高效液相色谱—二极管阵列检测器(HPLC-DAD)，建立了内标法测定芦荟成分含量的检测方法，为功能性纺织品的质量控制提供参考。
1 试验部分
1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪：Agilent 1200，配有DAD检测器。超声波清洗器：DL-820E，上海之信仪器有限公司。芦荟苷、芦荟大黄素和大黄酚：中国药品生物制品检定所。1.8-二羟基蒽醌：德国 Dr. Ehrenstorfer Gmbh。甲醇：色谱纯。
1.2 内标溶液和标准溶液的配制
用甲醇将内标溶液配制成50 mg/L的内标储备液。再用甲醇稀释成 2.5 mg/L的内标工作液。
准确称取适量的标准品，用甲醇溶解并定容至100mL，配制成50mg/L的标准储备液，储存于4 ℃冰箱中。使用时，将各标准储备液用甲醇逐级稀释成标准工作溶液，现配现用。
1.3 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×150 mm，5 ?m)色谱柱；流动相为甲醇—0.1%磷酸（80:20，V/V）；流速1.0 mL/min；色谱柱温30 ℃；进样体积10 ?L；检测波长256 nm；分析时间15 min。按上述色谱条件得到标准溶液的色谱峰见图1。从图可以看出，3种被测物以及内标物完全分离，色谱峰形对称。
图1 标准溶液的色谱图
(a芦荟苷，b 芦荟大黄素，c 大黄酚，IS 1,8-二羟基蒽醌)
1.4 样品处理
将纺织品剪成5 mm×5 mm的碎片，混匀。称取1.00g样品，置于玻璃提取器中，准确加入10 mL内标工作液，旋紧盖子。将提取器置于60 ℃超声波浴中萃取30 min，拿出冷却至室温。提取液经0.45 ?m聚四氟乙烯薄膜过滤后，供HPLC/DAD测定。
2 结果与讨论
2.1 萃取条件的优化
试验比较了3种常用萃取技术超声波浴、水浴振荡、索氏抽提对提取量的影响，试验条件和结果见表1。从表1可以看出，超声波提取法的提取效果最好，水浴振荡其次，索氏提取法效果最差。索氏抽提提取时间长，提取过程中一直需要水浴加热，芦荟苷为热不稳定化合物，在长时间的加热过程中很容易转化为其他物质。水浴振荡操作简单，但提取效率低于超声波浴。因此，可确定使用超声波浴萃取纺织品中被测物最为合适。试验进一步优化了超声波浴条件，确定最佳提取条件为：料液比1:10(g/mL)，超声时间30 min，超声温度60 ℃。
表1 样品萃取方法的比较
2.2 方法的线性关系和检测限
分别配制一系列标准工作溶液，在选定的色谱条件下进行测定。以进样浓度为横坐标、被测物的色谱峰面积/内标物的色谱峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。线性回归相关数据见表2。3条标准曲线的线性关系良好(R2≥0.999)。按3倍信噪比估算方法检测低限，3种被测物的检测低限见表2。
表2 各被测化合物的回归曲线和检测低限
2.3 方法的回收率和精密度
称取经测定不含被测物的纺织品1.00 g，分别添加3种不同浓度水平的标准溶液，每个添加水平测定6个平行样，按照样品分析步骤1.4处理，进行添加回收率和精密度试验。试验结果见表3。在低、中、高3个添加水平内的平均回收率为95.3%～99.6%，且RSD值小于1.80%。
表3 被测物的空白回收率(n=6)
2.4 重现性
称取含有待测物的纺织品6份，每份1.00 g，按照“1.4”项下方法制备供试品溶液，用HPLC/DAD测定。结果芦荟苷含量为14.12 mg/kg，RSD为2.88%；芦荟大黄素含量为8.23mg/kg，RSD为2.27%；大黄酚的含量为7.46mg/kg，RSD为2.37%，说明本方法的重现性好。
3 结论
本研究采用高效液相色谱二极管阵列检测器同时测定纺织品中3种芦荟成分，用内标法定量。试验结果表明，该方法具有简便快捷、准确度高、重现性好的特点，适用于纺织品中芦荟成分的测定，可以为功能纺织品的质量监管提供检测方法。
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（作者单位：广州市纤维产品检测院）