高效液相色谱【固相萃取－高效液相色谱法测定饮用水中2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚】

　　【摘 要】采用C18固相萃取法预处理富集，纯甲醇作为洗脱剂，用液相色谱仪对水中的2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚进行了测定。该方法简便、经济，节省了萃取剂的用量，减少了样品的预处理时间，具有较好的灵敏度、准确度和精密度，最低检测浓度为0.05mg/L,回收率达80%以上。
　　【关键词】固相萃取；2,4-二氯酚；2,4,6-三氯酚；五氯酚；高效液相色谱
　　酚类化合物作为炼焦、造纸、化工等工业污水的主要污染物，是造成环境污染的主要原因之一。在氯化消毒过程中，氯与水中的酚类作用可形成卤代酚等产物，使水体带有强烈的氯酚臭味，引起饮用者的反感，且常规处理工艺不能有效地予以去除。《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006将2,4,6-三氯酚、五氯酚列为毒理指标，IARC将其列为第2B组致癌物。
　　对水中痕量氯酚的测定，前处理一般采用液液萃取法，需要的溶剂量大，样品处理时间长。固相萃取方法以其具有高效、快捷、方便和高选择性的特点，在环境分析化学中获得广泛应用。本文通过用C18柱进行固相萃取，结合高效液相色谱对水中的2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚进行测定，取得了满意的结果。
　　1、实验部分
　　仪器
　　高效液相色谱仪：Waters2489紫外检测器。
　　色谱分析条件：
　　色谱柱：SymmetryShieldTMRP18不锈钢柱，15cm×4.6mm，5μm；
　　检测器：紫外检测器，波长295nm；
　　流动相：80%甲醇-水溶液/1%乙酸（v/v）
　　甲醇HPLC级；高纯水，经0.22μm滤膜过滤；
　　流速：1ml/min；
　　进样体积：20ul；
　　操作温度：40℃。
　　固相萃取柱：Waters OASIS C18柱。
　　试剂
　　氯酚标液：2,4-二氯酚1000ug/ml、2,4,6-三氯酚1000ug/ml、五氯酚1000ug/ml，均购自国家标准物质中心。
　　氯酚标准使用混合液：取1.2.1氯酚标液分别稀释配制成2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚混合标准系列0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L。
　　甲醇：色谱纯。
　　冰乙酸：优级纯。
　　分析方法
　　样品前处理
　　将SPE柱用10ml甲醇浸润2分钟后淋洗使其活化，再用10ml蒸馏水将柱中甲醇洗去，并在柱内保持水层，取500ml水样，以5-10ml/min的速度过柱。若水样是生活饮用水，先用无水亚硫酸钠脱氯；若是地表水则用快速定量滤纸过滤后过柱。水样富集完毕后，继续吸空气10min干燥。再用2.0ml纯甲醇进行洗脱，收集于刻度洗脱瓶中定容至1.0ml待测定。
　　分别取氯酚混合标准溶液0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L，按以上色谱条件各取标准溶液20ul注入。以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
　　色谱峰见下图
　　定量方法
　　根据峰面积外标定量法计算2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚的含量。
　　2、结果与讨论
　　2.1波长的选择
　　2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚的特征波长分别为295nm、295nm、305nm，经实验在295nm波长三种物质峰高、峰面积、峰形较好，有利于单波长检测器检测。
　　2.2方法灵敏度
　　在上述色谱条件下，2,4-二氯酚回归方程式为y=-4640+18206x，r=0.999934；2,4,6-三氯酚回归方程式为y=-4137+16487x，r=0.999964；五氯酚为y=-3306+10600x，r=0.999951(x为浓度mg/L,y为峰面积(微伏*秒))。线性范围都是0.05-1.0mg/L，其最低检测浓度均为0.05mg/L。
　　准确度与精密度
　　选用C18固相萃取柱，四氢呋喃为洗脱剂测定配制水样中的2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚，结果见下表。
　　平均回收率2,4-二氯酚为97.2%，2,4,6-三氯酚为99.5%，五氯酚为82.9%；相对标准偏差2,4-二氯酚为2.45%，2,4,6-三氯酚为4.69%，五氯酚为2.28%。相对标准偏差均小于5%，符合样品分析要求。
　　3、结论
　　本文选用灵敏、快速、分离效果好的高效液相色谱分析2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚；在选用C18作固定相，纯甲醇作为洗脱剂的条件下，可以得到较好的萃取效果。该方法检出限低，线性关系良好，适合于自来水、矿泉水等的测定。
　　参考文献
　　[1]生活饮用水卫生标准.中华人民共和国卫生部GB5749-2006
　　[2]张莘民,杨凯.固相萃取技术在我国环境分析化学中的应用.中国环境监测,2000,16(3):53-57