【榨菜下胚轴离体培养植株再生体系的建立】 榨菜植株
摘要：以榨菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｚｅｒｎ． ｅｔ Ｃｏｓｓ． ｖａｒ． ｔｕｍｉｄａ）Ｂ２－１０１４的下胚轴为外植体，研究了不同浓度的激素以及不同激素组合对愈伤组织、不定芽和不定根诱导的影响。结果表明，榨菜茎段离体培养的植株高频再生体系中愈伤组织诱导培养基为ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．８ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，不定芽诱导培养基为ＭＳ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，不定根诱导培养基为ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，在此培养条件下，Ｂ２－１０１４愈伤组织的诱导率达９０．０％，不定芽诱导率达９２．２％，不定根诱导率达９７．８％。
关键词：榨菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｚｅｒｎ． ｅｔ Ｃｏｓｓ． ｖａｒ． ｔｕｍｉｄａ）；下胚轴；组织培养；再生植株
中图分类号：Ｑ９４９．７４８．３；Ｑ９４３．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）16－3628-04
Establishment of the Regeneration System for in vitro Hypocotyl Culture of
Brassica juncea var. tumida
ＺＨＡＮＧ Ｙａｎ－ｍｅｉ，ＹＵ Ｘｉ－ｈｏｎｇ，ＪＩＡＮＧ Ｘｉｎ－ｍｅｉ，ＬＵ Ｚｈｉ－ｑｕａｎ，ＣＯＮＧ Ｃｈａｏ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｒｂｉｎ １５００３０， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ ｏｆ ｐｉｃｋｌｅ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｚｅｒｎ．ｅｔ Ｃｏｓｓ． ｖａｒ． ｔｕｍｉｄａ） ｍａｔｅｒｉａｌ Ｂ２－１０１４ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ， ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ａｎｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃａｌｌｕｓ， ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ａｎｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．８ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ， ＭＳ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ， ａｎｄ ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ； ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ， ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ａｎｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔ of Ｂ２－１０１４ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ up ｔｏ ９０．０％， ９２．２％， ａｎｄ ９７．８％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｉｃｋｌｅ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｚｅｒｎ． ｅｔ Ｃｏｓｓ． ｖａｒ． ｔｕｍｉｄａ）； ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｎｔ
榨菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｚｅｒｎ． ｅｔ Ｃｏｓｓ． ｖａｒ． ｔｕｍｉｄａ）属十字花科芸薹属芥菜种中以肉质茎为产品的一个变种，属于茎用芥菜。榨菜是中国特产蔬菜，在国际市场上与欧洲酸菜、日本酱菜齐名，被誉为世界三大名腌菜之一，在中国蔬菜加工生产中占有重要的地位，对提高农民收入、发展乡镇企业、提供就业机会以及出口创汇等有着重要意义。
关于离体培养，在芸薹属作物大白菜和青花菜等植株的再生体系方面有很多的相关报道［１－３］，对于榨菜离体培养，已通过带柄子叶、下胚轴培养获得了再生植株［４，５］，陈石头等［４］报道的再生频率高达９０％以上，其他研究的再生频率较低，一般为５０％～６０％［６］。采用不同株系的榨菜、不同的激素［7］、不同培养基，榨菜离体培养的植株再生体系就有可能不同，试验通过对榨菜的下胚轴进行离体培养，研究榨菜的不同株系、不同苗龄以及不同激素组合对再生体系的影响，旨在寻找榨菜外植体离体培养的适宜条件，为榨菜育种材料的保存和繁殖提供可靠的试验方法，也为榨菜多倍体育种打下良好的基础。
１ 材料与方法
１．１ 材料
榨菜Ｂ２－１０１４、Ｂ２－１０２０、ＢＺ⊕－１００５、ＢＺ⊕－１００３由东北农业大学蔬菜生理与设施园艺研究室提供，激素６－ＢＡ、２，４－Ｄ、ＮＡＡ由郑州绿博生物科技有限公司提供。
１．２ 方法
１．２．１ 无菌苗的获得 参照陈竹君等［8］的方法，将精选后的榨菜种子先用体积分数为７０％的乙醇振荡灭菌９０ ｓ，接下来加入１００ ｇ／Ｌ次氯酸钠溶液振荡灭菌１０ ｍｉｎ，然后用无菌水冲洗５次，最后接种于ＭＳ培养基上。于（２５±２） ℃下光照培养，光照度为２ ０００ ｌｘ，光照时间为１６ ｈ／ｄ。
１．２．２ 榨菜株系种类的筛选 选用榨菜Ｂ２－１０１４、Ｂ２－１０２０、ＢＺ⊕－１００５和ＢＺ⊕－１００３这４种株系进行无菌培育，培育４ ｄ后取下胚轴接种于ＭＳ培养基中进行愈伤组织诱导。每种培养基中均添加３０ ｇ／Ｌ蔗糖、８ ｇ／Ｌ琼脂、２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．４ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ［４］，接种１４ ｄ后统计愈伤组织的诱导率。每个处理的外植体为３０个，３次重复。
１．２．３ 榨菜苗龄大小的筛选 将不同苗龄（３、４、５、６、７ ｄ）榨菜幼苗的下胚轴切成０．５ ｃｍ小段，接种于ＭＳ培养基中进行愈伤组织诱导。每种培养基中均添加３０ ｇ／Ｌ蔗糖、８ ｇ／Ｌ琼脂、２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．４ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ。接种１４ ｄ后统计愈伤组织的诱导率。每个处理的外植体为３０个，３次重复。