羟基和羟基自由基 [黄芩总黄酮的提取及羟基自由基清除方法比较]

发 油化 学等成 。 　分

３ ２体 外抗 茵 果效　．

菌 有 抗成 分效 基本都有 ， 此 ，抗 作 菌可用 能是多种 化 调　 　因 其学分成综合 用 作结的 果 ，药其效与 药理 作机用 制还有待 进 查　

　一

白花 草

醇 提乙 取 物体 抑 外 试菌验 结表 明 ，果 其对 大 　肠 杆 菌 氏杆 、 菌 、门氏 菌 、黄 色葡萄球 菌等 常 见 病 巴　沙 原 金菌 有具明显 的抑制 作 用．敏高菌 有 黄 金 色葡 球 萄 菌、 　巴 杆 菌氏和 沙 门 菌 ，其抑 氏 圈菌直径 别分 为 （ ７８ 　 １ ．±２

４ ）２ ｍ、１ ．０± ５１ ｍ和（ ６ Ｏ ．２ （ｍ６８ ．５） ｍ １ ．０± ３ ｍ４ 敏； 　６）．ｍ 中

步

深入研 究 。白草花 有来具 广源、 价便 宜格 、多病种 　 研 原　 对

菌均

有强较的 抗 菌作 用等 点 ， 优可用于 医兽 临床 治疗 相关

　 原 菌引病 的疾病起 有 ，一定 开的 应发用前 景 具 　

。考文参献 ：

究　 　

［］

１周萍 主． 中国 民 百间 良方草 ． ＭＥ］长沙 ：南湖学技科 术出版　社 ，

２ ００ ２ 　．

菌

有 大肠 菌 杆和链 菌球 ，抑 菌 圈 直径 分 别 为 （ ３ 　 ４ １ 其０．±２ １

ｍ 和（ ４３． ５）ｍ １ ０．± １８） ２． ｍｍ。 花 草白乙 醇 提取 物 对金 　 黄 葡色萄 球 菌 的 Ｍ Ｃ 为 ０ ３ｇ０； 巴 对氏杆 菌 和沙 门 Ｉ ．６　　 ／ｍ Ｌ 杆 氏 菌 ０为５１ ； ｇ 链 球 菌为０ ２　／； 肠 杆 菌为　 ．２　／ 对ｍＬ ５ｇ．ｍＬ ０５ｇ 大 可 见Ｌ 花 白 乙草 提 醇 物 对 取 色 金葡 萄球 菌的 菌 　抑． ／。 　ｍ

［ ２ ］洪冯民 间兽钱医本草 ．［： ］ 北京Ｍ 科学技术文献版出社 ９ ，３１９ ． 　 ］［３ 张秀 ＿ 中药琴学化 ［ ． 京：国医药 科技出版 ，０ 社 ３］Ｍ 北 ２０．中

［］ 　 ４林寿 启－中草药 化学成分分 析Ｅ． ： Ｍ］ 京 科学北出版社１９ ： ９ ７

　１ －３３ 　４ ７．１

作 最 用明显 。

　３３ ． 小结　

［］５ 韩 文瑜． 原 细病检菌验技 ［术． Ｍ］长春 ： 吉 科林技学 术出　

版 社， ９ ２９ ． １

　花白 乙醇提 草物 对 取种病原５菌 有 明 显的制抑 作用。

　］ ６ 任仁［．安中 药定鉴学［． Ｍ］ 上： 上海科海 出技版社 ９ ，６４ ６ ８１ ６ ．： ［］ ７　陈奇 ． 药 理学实 验 ．［ 中 药］Ｍ 海 上 上海：科 学技 术 出版　

，社９ ８１． ８

　现

知已具有 抗炎作用 的 中草药 分成有生物 、碱有 机 酸、黄

　酮 其及 类 甙、 甙和 挥 发 等油化 学 成分 白｝花草中 这些　皂 ４ １ 。

空

白 试 剂为参 比 ５０， 处 测 ｎ

定

吸 光度 １ 以Ｉ 丁芦 量 为　含在 １　 ｍ ８。￣． ９ 横坐 标 光 ，度 为值纵坐标 作 回 归 线曲 。 吸　

１ ． 黄 提酮取 工 艺流 程 及含量 测定　 ．２ ４１ ． 黄 酮 提． 取工艺 程流． １２ 准 ４确 称取黄 芩 粉 末 １ ０ 　　， ．０ ０ ｇ　０

在乙醇浓 度 为 ６ ％ 取、时 间 ５３ｈ 液 比为 料： １、０取 温 　０ 提 、 　．５

提度６ ｏ 条 件 ℃ 进 下行回 提流取 ， 热 过滤 ， 渣滤 继续回 流 趁，将 　

重

３复， ３次 滤液 合 ， 缩并至 浸 膏 ， 状 ６％ 乙 定醇 容 次　 将 浓用０

于 ０ｍ １　０ Ｌ的 量 容 中 （ 瓶行 ５ ）　份 平 。４２２１ 样 品中 黄 酮含 量 测 的　定 准 吸取确１ ０ｍ ．． ．． 　 Ｌ 的样品　 Ｏ

备用 液 照 １，． ．， 样定品 在 ０ｎ５ 的 处吸光 度值 ，参 ．１ 测４２ 　１ｍ由

　下式计 算样 品中总 酮黄 量 含：　

ｙ 　：

Ｗ

式　中 ： ， 黄 总酮含 量，ｇ ；为 芦 丁 含量， ｇｄ 为 释　 ｊ稀为 ／ｍ ｇ　ｍ ； 倍 ； Ｗ为 黄数 芩粉末 质量 ．。 ｇ 　 １．黄 酮 类 化合 物清 除 羟 基 自由 基测 　定．３ ４１ ． 邻 二．氮菲 一 酸缓 冲 液法¨ 方 法此中 由 二邻氮 菲 和 ．　３ １４ 磷 ｏｌ硫 酸 铁亚 产生 有 色 质 物加 ．入 过氧 氢 产 化 羟生 自基 基由 ， 可　利 用 其产 生 有的色 物 的 质吸光 度 值 来检测 羟 基自 由基 ，　 加入

调　

导 致衰 老 和疾 病。笔者 等 采用超 声 波 辅 助 提 取法 提 取黄 芩 中　

的 黄 酮 ，采用 分光光 度 Ｉ 测法羟 基自由 基 ， 不 同 的过方 　并　 检 通

黄酮 样品液 会 使 得 其 中 的 有色 物质 减 少 此 ，时 溶 液 吸的光　 而 值也度随之会小减， 此因 可 以计 算 黄 样酮品 提取 液对 基羟自

　查

　研

法测 定黄 芩黄 酮提 取中 液对 羟 基自由 基的 清除能 力 　

。１材 与料方 法

　１１ 材 　料 　．

由

基 的 除清率 。 空 白 参比 （ 。 ①：Ａ ） 确 准吸 取磷酸 缓冲液 （ Ｂ Ｐ Ｓ　，

Ｈｐ 值为 ７） Ｏ．Ｌ 蒸馏水 ０８ ，ｍ． １ 　 ４ ，８ｍ． 　 Ｌ 容定 于 ．ｌ　 Ｌ容 量 　瓶２ ０ ０ ｍ ０ ，中 匀 为 作空 白参 比 调零 ； 未 损 （伤 ： 。Ｘ５　ｍ ｌ １ 摇 ②　 Ａ 加 　　０） ｏ ／

邻 Ｌ二氮 菲 ０ ６　Ｌ （ 同 ）Ｐ Ｓ ８１　Ｌ ． ． ｍ０ 下 ， Ｂ　 ． ，ｍ７×１５。ｍ ｌ 　 ００ Ｌｏ ／

究

　黄 芩

： 自甘肃 陇西 。黄 芩 蒸用 水馏 洗 后 净切 片， 于 产 　将 烘置 箱０℃ ）（ 干 恒 至重 ，碎 后 过

６ 筛 备用目。 ４烘 研 Ｏ 　

１ ２　 试 剂．　

Ｆ

Ｓ　 液 １ｍ ０ 同（ ） 蒸 馏 用水定 至容１． Ｌ摇匀 ；ｅＯ溶 Ｌ． ２ 下，Ｏ ０ ｍ Ｏ ③　，损 伤 （２ Ａ ）加邻： 氮二菲 ００ Ｌ Ｐ １Ｓ Ｌ０ＦＳ ４液 １ Ｌ　Ｏ ．　 ，Ｂ　 ．　 ｅＯ 溶 ，６ ８ｍ ｍｒ ２ ａ，１ ２

２ 液 １ ０ ，ｍ蒸 馏 定 容水至 ｌ．　 Ｌ 摇 匀 ；样品 　％Ｈ ０溶 ．　Ｌ 用Ｏ０ ０ｍ ，ｏ ④

７％

醇乙 ， 丁（ 药 国 品 生物制 品检 定所 硝 ）酸 铝 ０ 芦， 中 ， 　氢 氧化 钠 ， 硝 酸 钠 ，酸缓 液冲（ Ｂ Ｈ值， ４７ 二，氮 菲 亚， Ｐ磷 Ｓ ．）邻ｐ 　硫酸

铁亚 ， 杨水酸 一乙醇 ， 氧 化氢 ，丹明 ，Ｂ 硫 ，酸酸 　 过 罗浓硫 亚 铁 ， 杨 铵 酸一乙 醇， ｒ—Ｃ （ 羟甲 基氨 基 烷甲 一盐 　酸水 Ｔｉ ＨＩ 三ｓ

参

比 　（ Ｂ ：． 　　Ｌ 黄 酮 样品 取提 液 １ ０ ｍ 蒸， 馏 水　Ａ ） Ｐ １Ｓ ｍ ０ ，８ ．　用ＬＯ

定 容 １至．０ｍ， 匀 加 ； （药　 ： 邻二氮 菲 ６０　 Ｌ ，０　０ Ｌ ⑤ Ａ）加摇 ｍ ． 　０Ｐ

Ｓ１　 Ｌ ｅＯ８溶 液 １ ０ｍ， 酮 样品 提 取 液 ０１ｍ Ｂ　 　．ｍ ０Ｆ，Ｓ ．　　Ｌ ２黄． 　 Ｌ ， Ｏ １　　液 １ ｍ ０，％ ０ 溶 ．Ｈ Ｌ 　蒸 用馏水 定 容 至 ｌ．　 Ｌ摇匀 。将 上 Ｏ　 ０ ｍＯ ， 述０各 试 液 时 同置于 恒 温 水浴 锅 中，℃７保 温 反 ｌ应， 后　 ３然　 ｈ 在 ５６ｎｌ 长处 测 定 各 吸 度 值光， 以０５ ０ｍ０ ／Ｌ芦 丁 溶 ３　ｌ　 波Ｔ ．　　 ｇ ｍ ０液为 对 照 样品 ， 用下 计式 算黄 酮 对 羟基 自 基 的 清 除由 率 ： 并 　羟 自由基基 清 率除： 　

ｔ 一 ２ ＾ ， ａＪ１　

缓

液 ０冲 １ Ｌｏ ） 试 均 剂为分 析纯 ，验用 水 为 蒸 馏 水。 ． ｌ ｍ 　等 ／试　

１ ．３ 仪 器与 备设　

Ｆ ｗ１７７型 草 中药粉 机碎 （津 斯泰特 器仪 司公） Ｄ 一 　 天 ８ Ｌ； ０１ 智 能 声波超清 洗 机（ 海之信 器仪 有 公限司 ）Ｓ Ｂ 循环 式１　上 ； Ｈ 一 １Ｉ 多 用真 泵空 （ 长州城科 工 有贸 公限 司）Ｗ Ｆ２０ 郑； １Ｊ０型可见 分 光　 光度 计（海 龙尼 柯仪 有器 限 司 公） 一Ｈ 上； ４Ｈ 数 恒显温 水 浴 　

锅×１００ ％　 此方 与法 １． 方 中法 不　同． １５

（ 州

国华 有限公司 ） 度酸 计 常；； 酒精 ；Ｅ计５ 转蒸发 仪 Ｒ（ 一旋 ２上

海青 　沪 浦 西器 厂仪 ）。实 中所验 仪 器用均 过经 蒸馏 水 润 洗 。　１４

方 法 　．

　１４３ 邻２二 氮菲 一蒸馏 水 法

．

．．

的 是

用 馏 水蒸 代 磷 酸 缓替 液冲， 由邻 氮二菲 和硫 酸 亚 显铁　

色， 人 过 氧化 氢 产 生 羟基 自 由 基 用， 其产 生的 有 色物质 加 利　

４１ １ 准 标线 绘曲制 　．． １ ． 芦．丁标 溶液 的准制 配 １１． ４ 准 确称　取 丁对芦 照 ０品０　　 ， ． ３ｇ　 ０ ０加少 量７ ％醇 ， 乙热溶 解 后 ，５ ｌ 量 中 ，瓶 同 度浓 　０ 微置 Ｏ“ Ｌ容 用醇 乙定容 度 。 ６０为００ｒ／ Ｅ准 吸 取确２ ． 　 Ｌ 容，至　 浓 ．０　 　 ｇ ａ。 ｍ Ｏ Ｏ ｍ定 ０５　 ， 匀Ｌ， ｍ 摇 ０得即 丁芦对 照 液，度 为００２０ｍ ／Ｌ　 浓． 　　ｇ 。 ４ ｍ

的

吸 光 度 值 检来 羟测 自由 基 基， 计 算黄 酮 样品提 取液 对 　羟

并基自由 基清除率 。 空 白参 比 （。 ： 蒸 馏水 作 为 空白 比参 ；① Ａ用）

　 未 ② 伤 损 ）（５１－× ｌｍＡ． ０：　 Ｌｏ的 二邻 氮菲 （ 同 ） ０ 　６Ｌ　 ３／ 下 加 ．ｍ ，

０７５×～１ ｍｌ Ｏｅ溶 ０液 ｍ０（ 同 ） ． ｏＬ０ＳＦ　 ．／ 下Ｌ８ ，用 馏 蒸水 定 至　容

１ Ｌ ０ ０ｍ 容量．瓶 中， ０摇 匀 ； （伤 ２： 氮二菲０ ０ ＬＳＦ ③　 Ａ损）加 邻 ． ｍ， Ｏｅ ６溶 液０ ０ ２ Ｌ２２ ． 　 Ｌ蒸用馏水 定 容 至． 　Ｌｌ摇匀 ； ． 　， ％ Ｈ　２ ０ ， ８ｍ ｍ０ １０ ｍ ，０ Ｏ

④ 样 　 品 参 比（　 ： １ ０ｍＡ ）取 ． 　Ｌ 的黄 酮 样 品提取 液 ， 馏 蒸　水Ｏ 用

１． 标 ． 准 曲线 绘制　 准 确吸 取 芦丁 对 照 液０ 、０．　 ．Ｏ１４ ２． Ｏ２、 ０

６０、 ． ． 、 ．、、． 　Ｌ ． １２１ ０４ ３２Ｏ ｍ 分 别 置， 于７ 支１ 　具 Ｌ塞试　 ０ ０８ ｏ ０ ０ 管ｍ 中， 乙 醇 释稀 至 ４Ｏ 　Ｌ 密 精 ５加Ｎ Ｎ ．　　 Ｌ 　摇 用． ｍ ０ ，％ ａ Ｏ０４ ｍ ，０ 匀 置 ，ｒ６ｎ ， ％１ （Ａ Ｏ）０ ０ｍ ， 匀 ， 置 ｉ， ６ ａ静 后 加 ｉ０１ Ｎ ３ ３ ．Ｌ摇 　４ ａ ｒ ｎ静　再 加 入 ５ ＮＯ 　 ． 　 Ｌ定容 １至． 　 Ｌ静 置 １ ｉ，　％ ａ Ｈ ４Ｏ ｍ， ００Ｏ ｍ ，０ ５ｒ 以ｎ　

ａ 容定 至 ．１　 Ｌ 摇 匀 ；加药 （ 　 邻 二 氮：菲 ０ 　 Ｌ６ 　Ｏ ｍＯ ， ０ ⑤ ）加Ａ ｍ． ，０ Ｆ

４ Ｓ 液 Ｏｍ０， 黄 酮 样提品取 液 １ ０，Ｈ％０．　 Ｌ　　ｅＯ ．溶　 ８ Ｌ 　 ．２ ２２２ ｍ ， ＯＬｍ ０

１ 用蒸馏水 容 定至ｌ． 　 Ｌ摇 匀 。０ ０ ｍ Ｏ 将，上述 试各 液 时置同于 　３ 　７ ｃ

２ ０年ｃ 第５ 期 鞴 　　 １０

恒

温 水浴锅 中 温保反

应 ｈ １ ，在　５ ６ ｎ波长 处 测 其 吸 度光 　　ｍ３ ， ０５００值ｍ／Ｌ芦 丁 溶 液 为作对 照 品样， 下 用式计 算　以 ． 　 ｇ ０　 ｍ 黄酮 并羟 基 自由对 基的清除 率 ：

式 计 算下 酮 黄对羟 基 自由基 的清 除率 ：

　 姒 甘白ｒ苴： ｝漕 　 盘Ａ一一（ 　 肋 ） １ ｎ ． 　２Ａ Ａ — 　ｎ

一 … 一０ ” 　…… …　

．

６ ３二邻氮 菲 一 ｒ—Ｃ 缓 液冲法 ． Ｔ ｉ Ｈ１ ｓ

方 法 此 １与 ．　法 １． ５

羟方 基由自基 清 除 ：率　

ｌ 一　 ２　

１ ００ 　

％

不同 的是 用ｉＴ Ｈ 冲１ 液 取 代 了 磷 酸缓 冲， 反 应 原理　ｒ —Ｃ ｓ缓 １其１ 法 中的 反 ５应原 相 同理。 ①在 　 １容 Ｌ 量 瓶中 次依 　．．方 ０

ｍ 入Ｔｉ ＨＩ 液 冲２ ０ 　Ｌ １ ｒ—Ｃ 缓 ｓ ． ｍ，． ０５×１ －ｏ Ｌ ＳＦ４ 液　 ０ 　ｍ ｌ 　 ｅＯ 溶／

１

． 水．杨 酸 一 硫酸 亚 铁法 … 此 方 采 法 用ｔＦ． ３ ３４ Ｉ ｅ 体ｎ系 产　ｏ

生 羟基 由基 自 ，后由 系体 的 中 杨 酸水 一乙 捕 醇捉 羟基 由 自 然　

０Ｌ ５ｍｏ 邻Ｌ二 氮 菲２ ＯＬ 用 馏蒸水 定 容 ， 匀 ，　 ｌ为 ｍ　．ｍ ｌ 　／．ｒ ， ０ａ 摇作

并 基产生 有 色物 质 ， 时 ， 色有 物 质在５ ｒ０波 长 处有 最 　 该 １　此 ｉ 大 吸ｍ 收， 随着 羟 自 基由 清 除 剂基， 黄 酮 样品 提 液取 加的 　但即 人 ，物 色 质 会随 之减少 ，５０ ｎ 长ｌ 处 吸光 度 也值会 减 有　 １　ｌ在 波ｌ

损 （ 。伤 在；ｌｍ 的Ｌ 量容瓶 中 依 加 入次Ｔ Ｈ ｉ 冲１液　Ａ ） ② ｒＯ—Ｃ 缓 ｓ

ｍＬ０， 　 １ ５．１。ｍ×ｏ ＦＬ Ｓ４ 液 ０ 　８ ， ．％ ２Ｈ　 ０．ｍ， ０Ｌ ｌ 　 ｅ Ｏ 溶／．０ｍＬ ０３ ０２ ０ 　 　１

ｏ Ｌｌ 氮 菲二 ２０ｍ ，ｌ ｍ邻 ／ Ｌ 用蒸． 馏 定容水， 匀 为，损伤（ ：； ０摇 作 Ａ ）　 Ｔｉ Ｈ １冲液 ２０ Ｌ黄酮 样品 取 液提１ ０Ｌ 定 容至　 ｒ— Ｃ 缓 ｓ 　． Ｏｍ， ．　 ，０ ｍ

．小 此 可因 计 算 黄 酮样品 提 取 对液羟 基自 由基的清 除 率 。①

以　蒸 馏 水为空 白参 比； 未 损 ②伤 （ 。： 　ｍｌ ｅ　 Ｏ溶液　 Ａ ） ９ｍ ｏＬ ＦＳ 　／ ０８　 Ｌ 下 同９ｍ ｏ）水 Ｌ 酸 杨乙 醇一溶 液０６ 　Ｌ，蒸 馏 　 ｍ（．Ｏ ， ｍ　１ ］ ． ｍ 用０

Ｌ ，ｍ作为 样 参品比 （ 　； ④ 在１　 ） Ａｍ０Ｌ 量瓶容 依中次 加 入 　一

Ｈ １冲液 ２ ｍ０，． ０ ｏＬＦ Ｓ 　Ｃ 缓． １ ＬＯ ×５　ｍ１ｌ ｅ Ｏ溶液 ０ Ｏ Ｌ 　黄／ ．

ｍ，

８

水 定容至 ｌ．　 ，Ｌ 匀 为 作 未 伤损 ； 损 （伤 ：： 　 ｌ 　 ０Ｏ ｍ ｍ混 ③ Ａ０ ）９ｍ Ｌ ｏＦＦ

　 Ｓ 液０８　 Ｌ９ｍ ｏＬ 水杨 酸一 醇 乙 液溶０ ６ 　Ｌ 　Ｏｅ溶 ．ｍ ， ｍ　Ｉ ０ ｆ．ｍ ， ０ １　１ ２ｍ０ ， 蒸 馏定 容水 至１． 　 Ｌ 混 匀 作为 损 伤 ； ％Ｈ ．０ 　Ｌ用 Ｏ ＯＯｍ ， ０ 　 样④品参 比 （　：　 ｍｌ　 ｅ ０溶液 ０８　 Ｌ　 ，ｍ ］Ａ）９ｍ ＬｏＳＦ ／４ ０ｍ．９ ｏＬｍ水　ｆ 杨 一酸 乙醇 溶 Ｏ液６ 　 黄Ｌ 酮 样品 提 取 液 １０ ｍ ， 蒸　馏 ． ｍ，０ ．Ｌ　用

Ｏ

品萍提取 液 ０１ｍ， Ｈ０＿０　　 Ｌ 再加 入 ｍ５ｏ Ｌ　的． 　Ｌ ０ ２３ ２ ．ｍ ０，％ １０ 　ｍｌ ／ 二 氮 菲２０ ｍ， ．Ｌ　 用蒸馏 水 定 ，容匀 ， 为加 药（　 。 将上述　 Ｏ 摇作 ） 式液 同Ａ 置时 ３于 ７恒温℃水浴 锅中保 温 应反 １ ，５ｒ ６　在 ３ｍ　　 ｈ波 ｉ

侧

吸其 光值，度． Ｌ 溶ｇ液 为以　０／ 芦 丁 ５ ｍｍ 照样对，品用 下并 　十笪

酮茜对 粹 某 自 南 基涪的除 搴 ．

Ｉ 　

水调定 容至ｌ ． 　 Ｌ ，匀作 提 取为液 本 吸 光底 度 ； 值　 加Ｏ０ｍ 混 ⑤０

（药 ：　ｍ ｌ Ｆ Ｓ Ａ　） ９ ｏｍ ｅＯ Ｌ液溶０ ０ ，ｍ ｏＬ ／ ．ｍ９Ｌｍ ］ 水杨 一 ８ ］酸乙 溶醇　 液 ００ｍ ，酮 样 品 提 取液 １０ ｍ１ ，２２． 　Ｌ 用 馏蒸 ，　　黄Ｌ６ ．　 ％Ｈ０Ｌ　Ｏ ， Ｏ ｍ０

１ 水 容定至 ｌ ． 　Ｌ 混匀 作为 加 药 。其 中 酮 样 黄提 品 取 液　是０Ｏ ｍ ， ０

羟 自基除 ：二 上二 ／ １ 由 基 清　率 冬　 　 ０ ． ０ 　

＂ｌ一 　２

　 查

研　

　１

．７ 水杨 一酸酸硫亚铵 一铁馏蒸水法． ３ ．

该 ４法与方１５ 非法　 ． ５方

常

相 似， 不所 的同 是此 方法 中 蒸用 水馏 替代 了 １ 的． ．　 ５中

５究　

准 确 吸 取

Ｏ　１Ｌ稀 释至 ． １　 Ｌ 取再 １　ＯＬ 加入 。 上 　 ｍ． ０ ０ Ｏｍ， ０ ． ｍ０ 将述各试 同液时置于 ３７ ℃的 恒温 浴 水 锅中 温 反保应 ０ｈ ５在 　 ． ，　５ ０ｎ 波 长处测 其吸光度 值 。以０ ０５ｍ ０ １／　 ｍ 　　 ｇ ０ ．Ｌ芦 ｍ溶丁液 为　

Ｔｉ

Ｈ 冲１ ， ｒ— 液Ｃ 缓ｓ 反 应 原其理同 １． ．５ ５ 。① 未 伤 （ 损　：ｍ ．ｏ Ｌ ）７ Ａ　ｍ ｌ　 ／５ 的酸 亚铁硫铵 溶 液 ８０ 　Ｌ７ ｍ １ ５ ｍ ．，．ｍ ｏＬ水 酸 杨 ００ｍ 用 ， 蒸馏 　０ 　］ 　．Ｌ

８

水 容 至定 　１ ， ； 损匀伤 （ ：． ： ｏＬｍ硫酸 铁

亚铵溶　０ｍ 摇Ｌ ②Ａ ）７ ｍ５ 　 ｌＪ液 ８　 ０Ｌ７ ｍ５ｏ ｌ水 杨 酸０ ｍ０ ３，Ｈ 　Ｏ．　 Ｌ 用　． ｍ ， ｍ．ｌ ￣ ０ 　／ ． Ｌ 　 ０ ２２ ０ ％ｍ， ８ Ｉ０

馏 水 定 容蒸 至１　 Ｌ０ｍ ；③ 以１ ０ｍ ． 　Ｌ黄 酮 样 品 提 液取用 蒸 　 Ｏ

馏

对照 品 ， 样用下 式计 算 黄 酮对羟 基自 由基 的 清 除 ： 率 并

羟基 自基清由除率＝ 　（ ＝［ ×２１　 　 ｌ 　 　 ００Ａ，

水定至 容ｌ　 Ｌ作 样为参 比（ 　 ；品加 （药 　：． ｍ ｏ Ｌ０ ｍＡ ） ④ ）７Ａ ｍ ５ １ 　　］

硫酸亚 铁铵溶 液 ０８ 　 Ｌ ５７ｍ ｏ 水 杨 Ｌ酸 ０　 Ｌ，８ ． ｍ ， ｍ． ｌ 　０Ｊ ． ｍ　 加０

３ Ｏ：１． 　 Ｌ 酮黄样 提 取 液品 １ ０ｍ ， 蒸馏 定 容水至 　％Ｈ． ０ １０ｍ， ０． 　 用Ｌ ０１ Ｌ　 摇匀 。将上 述各 试 液 同 置 时 ３ 于 ０ ｍ， ７℃ 温 水恒 浴 锅中 温保　 反应 ０ｈ５ 在 ５０ 波ｎ长 处侧 吸其光 度 值 ，５Ｏ００ｒ ／Ｅ ． ． 　１　 ｍ 以 　．　 　ｇ０ ａ ｍ芦 丁 液溶为 对 样 品照， 并 用 式 下计 算黄 酮 对 基 羟由自 基　 的清除率 ： 　 羟基 自 由清基 率除 ：　 　二ｌ２

１

．．　 罗丹明 法　 Ｂ罗 丹明 Ｂ 本 就是身 一 种具有 较深颜 色　 ． ３４ ４的 物 质 ， 入ＨＯ 产 会生 基羟 自由 基。此时 ， ５ ８ｎ 加　 ： ５　在波ｍ 处　 长 最 有大吸收 但是 ， 随 着酮 样黄品提 取液 （羟 基自由 基的清除 剂） 　 的加 入 ， 物 色质 会少 ，减时 吸度 光值 也会随 之 减小 ，此可　 有 此 因以 测 检并计算 黄 酮类 化 物合 对羟 自 由基 基清 除的率 。 　 在　Ｊ 的Ｌ 比 管 色中依 次加 入 丹罗明 溶Ｂ 液（． ％ ）０ ｍ００ ０２ １ ０ｍ　 ，２ 溶 液 ０．（ ｌｍ）． ｍＬ Ｆ ４ Ｓ （液． ｌ 　ｍ． Ｌ Ｈｓ ４ ６０ｏ Ｌ８０２ ０／， Ｏ ｅ溶０ ４ｍ ｏ Ｌ ）

／２ ０ 　，Ｌ．％ Ｈ 溶 液００６ 　 Ｌ ０ｍ ０３． ２２ ．ｍ，摇 ，放 匀置 ５ ｒ 后 加 入ｎ 　 　ｉ ａ

０１０ 　０

２％０ 　Ｌ黄 酮样 品 取提液 ， 蒸馏 水 稀 至刻释 度 定， 其吸光　 ．ｍ０ 用 测度 Ａ 照， 溶 剂以 替代 样品 ．液 余 骤步同 前 ， ５８ Ｉ　波 ｓ对 其 在５　 ｌ

ｍ２

结 果 分与析

　１２标 准 曲线 与 回归 方 　 程．

长 处

测定 其 吸光 值度Ａ ， 白体 系 丹 （ Ｂ和明Ｈ 　 ｓ ） 液 罗空 ２溶０ 　 吸

光 度值　 以。 ０５０ｒ ／０Ｅ 芦 溶丁 液 为对照 样品 ， 用下　 ． 　　 ｇ ０ ａ ｍ并 式计算

黄

酮 对 羟 自基 基 由的清 除 ： 　

Ａ率— 　

果结 见图 １ 回 归 方 程 为 Ａ０ ０２ ２ ．＋５ 　７， ． ＝ ＝ 。．１ 　９ ０３９ Ｖ２ ０ Ｒ　９９

９ 　８７ 　。

羟

基 自基由 除率 清＝ Ｌ　　× ％　 ００

１Ａ— —Ａ　０

１

４３ ５水 杨 一酸 硫亚酸铁铵 一ｒ Ｃ 缓 冲液 法【— 于 １　 Ｌ．．， ｉＴＨ ｓ １－２ １０ 　

ｍ　《

色比管 中 次 依 加人 ５ｍ７ｏ Ｌ 的 酸 硫 铁亚铵 溶 液０ ８　 ， ． ｌｍ 　Ｊ．０ｍ Ｌ 　７　ｍ ．ｍｌ ｏＬ 水杨 的 一酸乙醇 １０ ｍ． ５ ，／ ．　 ０３Ｌ ０ 的 ％Ｏ Ｈ溶液 ０ｍ１ ，２ ２． Ｌ　　０ Ｔｉ Ｈ Ｉ冲 液 ２０　Ｌ ｒ — Ｃ ｓ ． 缓ｍ 最． 后 加 入黄 酮 品样 取提液 １０ｍ， ０ ．　Ｌ ０　

然在后 ３ ℃的 恒 温７水 浴锅中 保 温 反应０ ５ ｈ 在０ａ５波 长 　 ．，１ 　 　 处ｍ测 其 光吸度 值 。以 Ｏ０５０ ｍ／芦Ｌ丁 液溶为 对 照样 品， ．０ 　 　 ｍｇ并 　

Ｏ　　 ０

０５

１

　 Ｏ　

１

５　 Ｖ　Ｌ　 　

２ ０　

　２ 　

５

０　３　

图

ｌ芦 回丁归 曲线 　 　

　— ｗ—　

‘ｕ ｕ

■

十

　Ｊ

， 　

２２

黄 总 含酮量 测的定　 ．

力 　而 ，第 方 法 １中黄 酮 羟对 自基由 基的 清 能除 力 低 ，最种 清　除率 有只 ４ 　３ ．。％

考参文献 ： 　

结 果 见 １　 。表

表 １ 黄 芩总黄 酮含量　

］［ １

崔璐，

路俊仙 ，林慧彬 ， ． 黄芩国资 源及生产 现状　等

调我研查究． ［Ｊ针国时国医 ，药 ９ ０２ （ ）２ ９ ２ ８ ． Ｊ２０ ，０９ ： —７ ０　 ２２黄酮

含 ＾量 ｇｇ‘ ． ６ １． １ ４ｌ．５ １． 　 １１． １１．１ ｎ　 ・ － 　８１　 ８ ７ 　 ８ 　 ８３８ ９ ２ ２０ ８ ４　 ８ ３ ３

２

［］ 黄 远富 ２ ，高　明 ， 云雁 ． 酮 类 合化物 的 究研 概况　 楼黄

．

中

华中 医 药 学 刊０ ７ ，２（ ）１ —３ ２ ２７ ，０５ ：８ ０ ７３１ 　

结 ．果表 明，芩 总 中 黄酮含 量 １ ．为１　 ｇ。 黄 ２３８ ／ ｍ　

２ｇ 不３同 方法黄 酮 羟基 对由基自 的清 除 法 方比较　 ．

［ ］周桃 英， ３ 罗登宏 ， 志 军 ． 声 波 辅助 取 萃 荷叶 总　黄 曹 酮超工 艺 的 究研『 ］Ｊ中． 国 食品 添加 ，０剂 ９８ ：５２ ０， （ ） 　

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结 见 果图２ 　

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］谢 云 涛 ，平国 ４ ， 何马玉 凤， Ｐ 等 ．ＢＲ硫 脲 催 化光 法对　度 基羟 由自 基的 测检及 除清 用作… ．化 学 通报 ０ ，

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方法

［］ 李 英 志 ６， 张海 荣， 会 ． 梁艳 种葡５ 酒萄 除羟 清自由 的基　比较 【 Ｊ． １酒科 酿技，０ ２ （６ ２—） ８ ０ ２６ ４ ，６： ．２ 　 ［ ］ 忠合 王 ， 泳生 ． 勒叶 酮黄 提取的 及清除 自 基作　由７ 罗 用【】林 产 品加 工・ ，刊０９，７ ３ ： ７ ６． ．Ｊ农 学 ２ ０ ５（ —）１ ５　 ［ ］任 峰雪， 吴冬 青 ， ８永 王生 ， 声超 法提波 取 迎春 总　花等． 酮 工黄 艺的 研究 １ 光【 实谱 验室 ０， ，０ Ｉ ７： ， Ｊ１ ２ （２） 　 ２

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图２

黄中芩酮黄羟对基 自基清的除 　　由 率

结果 表 明 ， 芩黄 中黄 对 羟酮 自基由 基 具有 一 定 的 清 除 率 　，不 同方 法对 羟基 自 由基 却 有 不同的 清 除 能 力 ， 水　杨但 用 一酸 酸 亚硫铁 铵 ｒ一— Ｃ 缓 液 冲 法时， 芩 中 黄 酮 黄 羟 对　 基Ｔ Ｈ １ ｓｉ 自由基 的清 除 最率高 ， 达 ．６％， 使 用邻 二 氮 菲 一磷酸 　可 ７０

查 而

研　　

究缓

液 冲 时清 法 除 最率 低 有 ，３ 同４ 也可 时以看出 只，－ ， 在有 些　％方

中法 芩黄总黄 酮 对羟 基 自 由基 的 除 率 比芦清丁 小 ，在有 　些 而 方法，中黄 总芩 酮 黄对羟 基 自由 的基 清除能力 要 强 于 芦丁。 　

３ 论结　

［］ 丛 陈 ，瑾９ 黄 瀛 克 ，德李 良 香椿，叶 黄 总酮 超声 的　波 等． 辅 提助取及其 除 Ｄ Ｐ清自 基由 力能的 研究 ． Ｐ［ＨＪ 食 品 ］

与　机 械 ， ０７２ （ ） ６ ７ ． ２ ，５０ １： — ７ ７　

［ １Ｏ］ 张瑞菊， 国 英， 张 海 孙 波 ， 中黄．酮类分 组的提取 　等苦参

及抗氧化 性研的 ［究 Ｊ食．品与 机 械０，９ ２ （ ） ８ ７． 】０２， ５ ： ４ —１６ 　［１ １ ］ 王小华 ，邓 斌， 晓军 ．，薯 叶 酮黄 类化 合物的 　 等 张红 提取及 其抗 氧化 性活的测 定 ｆ ．化学 与生 物程工， Ｊ】

　 ０２ ， ２６） ２３ ． ９ ２ （０： —５３ 　

３１ 采 用ＮＮ １２Ｎ　 ３ＮＯ 分 光光 度 法 ５０ｎ，波 　 ．ａ Ｏ 一（ Ｏ ａ ） Ａ 一Ｈ 在１

　ｍ 下长 测 黄 量芩中 酮黄 总 量 为含１ ． １ ｇ　。 ８ ２ｍ３ ／　 ｇ ２ 黄３ 类 化 酮合物 有 具较 强的 清除 由基 自的 能力，对 羟基　 ． 自由基 具 有 定 一的 除清率 ，用不 同 方法 ， 酮对 羟 基 由　 使自黄

基就 具 有 不 同 的清除 能 ，力 图中 可２ 以看 出 ，以 上 ７　种 在由方

法中使 用 第５种 方 法 （杨 一硫 酸 酸亚铁 铵一 ｒ Ｃ 缓— 　 水ｉＴＨ １ ｓ 冲 液法 ）芩 中黄 酮 对 羟 基自 由 的 清 除 能 力基 最 强 除 ，　 率 清黄可 达 ６ ．

％， 强 相于 方同法 中 芦 丁 对 羟 自由基 的 清 基 能　除７Ｏ 且

［

２１］

卢静， 博超 张 姜，

， ．玮 等果 酸抗 氧熊化 能性的研　

… 究．品工业 科 ，０技 ２ ９（： ６ １７食 ２ ０， ５４） —１２ ２．　 ［

３１ ］ 琼 英 吴， 强 ．俊 黄皮 酮 超 的声波 辅助提 取及 抗 　氧 柚

贾化性研

究 ］ 品科【学 ，０ ，０ ９２） ３ ．９ Ｊ． 食 ０２３ （ ： ３—　 ２