肝干细胞移植治疗肝硬化疾病的研究进展:干细胞移植治疗肝硬化案例

　　【中图分类号】R657 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)08－0489－01　　【摘要】：如今，治疗肝硬化主要有三类方法: 原位肝移植；肝细胞移植；肝脏干细胞移植。前两种方法由于来源紧缺、费用高昂等缺点，难以成为临床常规治疗手段。近年来，伴随着对于细胞研究认识的深入及分子生物学和细胞生物工程技术的发展，通过干细胞移植治疗肝硬化逐渐成为研究的热点。本文从肝硬化疾病的定义入手，讨论了肝干细胞的分类和作用，详细介绍了肝干细胞治疗肝硬化的机制和研究进展。
　　【关键词】：肝硬化；肝细胞移植；研究进展
　　各种原因导致的终末期肝病患者内科治疗疗效均欠佳，病情常不能逆转，死亡率极高，肝移植的出现为终末期肝病的治疗提供了较为有效的方法，但肝源缺乏、费用昂贵、移植排斥反应免疫抑制剂引起并发症等成为限制其广泛应用的主要原因，为此，国内外众多专家正在努力探索肝衰竭新的治疗方法。干细胞具有向肝系细胞分化的潜能以及自身增殖的特性，通过干细胞移植后，能使其在肝脏中沉积并分化为成熟肝细胞以替代受损的肝组织而发挥功能。
　　一、 肝硬化疾病概述
　　肝硬化是一种常见的慢性肝病，可由一种或多种原因引起肝脏损害，肝脏呈进行性、弥漫性、纤维性病变。临床上经常遇到的各种难治性肝病，如门静脉高压症、肝功能不全或衰竭、肝癌等，都是由肝纤维化逐渐演变、发展而来。肝纤维化及其终末阶段肝硬化是全球性的常见病和多发病，危害性极大。
　　二、 肝干细胞移植治疗肝硬化的优势
　　原位肝移植能够从根本上改善肝功能、延长肝硬化患者的生存期，已成为理想的治疗选择，然而由于其供体紧缺、免疫排斥、费用高昂等缺点，使临床应用受到很大限制，很难成为常规治疗手段。肝细胞移植曾被认为是有希望的治疗方法，但大量研究最终证明，移植后的肝细胞在体内存活和增殖十分困难，临床实用价值不大。近年来随着对细胞研究认识的深入及分子生物学和细胞生物工程技术的发展，通过干细胞移植治疗肝硬化逐渐成为研究的热点，以肝脏干细胞为种子细胞的基因工程、干细胞工程乃至组织工程作为肝移植的替代方法越来越显示出良好的应用前景，为肝硬化的治疗提供了一种崭新方法。
　　三、 肝干细胞分类与作用
　　目前认为肝脏干细胞分为肝源性干细胞和非肝源性干细胞两类，其中典型 的肝源性干细胞有卵圆细胞、小肝细胞和肝细胞；非肝源性干细胞有胚胎干细胞、骨髓干细胞、胰腺上皮细胞等。
　　(一) 肝源性干细胞
　　1． 肝卵圆细胞
　　目前对卵圆细胞的起源仍缺乏明确的认识。由于卵圆细胞和骨髓干细胞表达共同的标志物，个体胚胎发育时肝和骨髓都具有造血功能，因此Oh等［2］认为在一些生理条件下，肝脏的卵圆细胞起源于骨髓。Wang等［3］则认为卵圆细胞不是源自骨髓，而是来自肝脏非实质细胞。
　　2． 小肝细胞
　　Sasaki等［4］认为小肝细胞是可以分化为成熟肝细胞的定向祖细胞，在培养基中可以选择性的增殖。
　　3． 成熟肝细胞
　　近年来认为它是具有增殖和分化潜能的干细胞。
　　(二) 非肝源性干细胞
　　1． 胚胎干细胞
　　Shiraki等［5］研究表明在不同的培养条件下，胚胎干细胞可以分化为肝细胞。 目前，人胚胎干细胞向肝脏分化多采用拟胚体法(EB)。其最大特点是具有空间 三维结构，与胚胎发育过程相仿。但EB的分化随机性较强，肝细胞诱导效率不高。
　　2． 骨髓干细胞
　　骨髓干细胞包括造血干细胞和骨髓间充质细胞。Sato等［6］将人骨髓间充质干细胞移植入接受丙烯醇治疗的大鼠体内，发现其可以分化为人肝细胞，这些细胞表达肝特异性标志。骨髓源性间充质干细胞在一定条件下可以分化生成数量不多的卵圆细胞。将脂肪间充质干细胞移植给肝脏损伤的小鼠，能降低血清中的转氨酶水平，同时增加白蛋白的含量。脂肪间充质干细胞较骨髓间充质干细胞具有更多的细胞来源、更大的扩增量，研究其肝细胞分化潜能将为肝病的细胞治疗提供更为理想的细胞来源。
　　3． 胰腺上皮细胞
　　胰腺上皮细胞在一定培养条件下可分化为肝细胞，且表达肝细胞特异的蛋白。
　　四、 干细胞主要移植方式
　　1、 经肝动脉介入移植
　　经肝动脉介入干细胞移植技术相对成熟，操作简单，是干细胞移植常用的方法之一。就是在数字减影机下经股动脉插管至肝固有动脉，造影观察后，经肝左、右动脉将干细胞悬液注入肝脏的操作技术。
　　2、 经门静脉移植
　　干细胞在体内向肝细胞分化需要嗜肝因子及生长因子等刺激因子组成的微环境，因此门静脉在理论上是移植的最佳部位。经皮经肝在超声下将干细胞直接注入门静脉，或在 X 射线透视下将导管插入门静脉造影后将干细胞注入门静脉，能够使其最大限度的停留在肝脏，为其在体内增殖分化提供合适的微环境。
　　五、 肝干细胞治疗肝硬化的临床应用
　　干细胞移植的实验研究取得很大成就，也为临床应用提供了依据，许多学者和临床工作者开始了更进一步的临床研究，在肝硬化疾病的应用研究中干细胞显示了特有的修复和抗炎作用。
　　Yannaki等［7］用粒细胞集落刺激因子动员骨髓后收集骨髓干细胞治疗2例肝硬化患者，发现肝内血管形成增多，Child、MELD评分改善，术后34周未因为肝硬化而住院治疗。Higashiyama等［8］的相关研究证实自体干细胞移植可以改善肝功能，延缓或阻止肝纤维化的发生，降低并发症发生。Pai等［9］采用自体干细胞移植治疗 9 例肝硬化患者也取得相似的疗效。
　　六、 干细胞移植在应用中存在的问题
　　干细胞能够自我增殖和定向分化，不仅可以成为肝衰竭患者度过危险期、等待肝源进行肝移植的一个过渡方法，又能直接修复损伤肝脏，作为细胞疗法应用于临床治疗肝衰竭、各种终末期肝病。然而，要真正将干细胞移植广泛应用于临床目前还有很多的问题需要进一步探究。
　　主要的问题有：（1）干细胞体外分离培养、鉴定等方面的技术尚未完全成熟；（2） 干细胞直接移植和体外分化后移植治疗的适应证及禁忌证；（3）移植方式、部位、最佳时机的选择以及移植细胞的最佳数量，如何避免血管栓塞的发生等细胞移植总是有待进一步探讨；（4）需要建立一个有效的体内跟踪体系，以便更好地观察干细胞在体内的归巢和定位；（5）干细胞移植治疗的长期疗效和安全性还有待进一步观察。
　　七、 展望
　　目前干细胞移植是世界上最前沿、最热门的研究热点，自体干细胞移植在治疗肝病方面已在英国、美国、中国取得理想疗效，被认为是治疗肝病的第2条“终极途径”。干细胞的来源充足，容易获得，增殖能力强，可以大量体外扩增，干细胞移植技术成熟，操作相对简单，安全性高，风险小，数日可出院，价格低廉，仅为肝脏移植的10%左右，采用自体移植方式可以完全避免移植后排斥反应。自体干细胞移植治疗肝脏疾病尽管不能完全替代肝脏移植和人工肝，但具有不可比拟的优点，必将使肝脏疾病的治疗进入一个崭新的时代。
　　参考文献
　　［1］ 郭晓钟,刘旭,王迪,等.自体骨髓干细胞移植对不同病因肝硬化的疗效研究［J］.中华消化杂志,2011,31(1):53-54.