阿司匹林丁香酚酯栓剂的制备及质量控制:阿司匹林栓

　　摘要：以半合成脂肪酸甘油酯为基质制备栓剂，对栓剂的外观与色泽、重量、融变时限、局部刺激性做了质量控制测定，并采用高效液相色普法测定阿司匹林丁香酚酯的含量。试验结果表明，该栓剂制备工艺可行，含量测定方法可靠；外观与色泽、重量、融变时限均符合药典规定，对兔直肠无刺激性；质量可控，稳定性好，无刺激性与不良反应，使用安全，可用于临床应用。
　　关键词：阿司匹林丁香酚酯；栓剂；质量控制
　　中图分类号：Ｒ９４４．２＋３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）14－2918-03
　　
　　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＡＥＥ Ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ
　　
　　ＹＵ Ｙｕａｎ－ｇｕａｎｇ１，ＬＩ Ｊｉａｎ－ｙｏｎｇ２，ＹＡＮＧ Ｙａ－ｊｕｎ２，ＬＩＵ Ｘｉ－ｗａｎｇ２，ＺＨＡＮＧ ＪＩ－ｙｕ２，ＮＩＵ Ｊｉａｎ－ｒｏｎｇ２，
　　ＺＨＯＵ Ｘｕ－ｚｈｅｎｇ２，WEI Xiao-juan2，ＬＩ Ｂｉｎｇ２，ＹＥ Ｄｅ－ｈｅ１
　　（１． Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０，Ｃｈｉｎａ； ２． Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ／ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｎｅｗ Ａｎｉｍａｌ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ／ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｎｅｗ Ａｎｉｍａｌ Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｇａｎｓｕ Pｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００５０， Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ aspirin eugenol ester（ＡＥＥ） ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｓｅｍｉ－ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｆａｔｔｙ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ； ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ， ｃｏｌｏｕｒ， ｗｅｉｇｈｔ， ｍｅｌｔｉｎｇ ｔｉｍｅ， ｌｏｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ． ＨＰＬＣ （Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ） ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ AEE． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＡＥＥ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｗａｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ． Ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｔｅｓｔ ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ ｆｏｒ ＡＥＥ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｃｏｎｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｓ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｐｒｅｐａｔｅｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｎｔｒｏｌｅｄ． Ｔｈｅ ＡＥＥ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｈａｄ ｎｏ ｉｒｒｉｔａｎｔ ａｎｄ ｐｅｓｓｉｍａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： aｓｐｉｒｉｎ ｅｕｇｅｎｏｌ ｅｓｔｅｒ； ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ； ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ
　　
　　丁香酚（Eｕｇｅｎｏｌ）是桃金娘科植物丁香的干燥花蕾所含挥发油中的主要成分，其有抑菌、麻醉、解热、抗氧化、抗肿瘤、促进透皮吸收、祛蚊等多种药理作用［１，２］。但由于挥发性和刺激性影响了其应用，我们将丁香酚与具有抗炎、抗风湿、抗血小板以及抗癌等多种用途的阿司匹林（Aｓｐｉｒｉｎ）经一定的化学反应合成一种新的酯类化合物――阿司匹林丁香酚酯（Aｓｐｉｒｉｎ ｅｕｇｅｎｏｌ ｅｓｔｅｒ，ＡＥＥ），解决了两种药物单独使用的不足和副作用，更具明显的优势：①未改变发挥临床作用的结构部位［３］，在体内协同发挥作用；②抵御脂质过氧化物的堆积，尤其是阻止自由基进一步氧化修饰低密度脂蛋白，防止单核细胞对内皮细胞的黏附、损伤及平滑肌细胞增殖与血小板的黏附、聚集，从而预防心血管疾病的发生；③清除体内自由基，具有一定的抗衰老作用；④无刺激性，不易氧化，常温保存稳定；⑤对胃肠无直接的酸刺激，减少了胃肠出血；⑥毒性更低。在急性毒性试验研究中对试验大鼠解剖未见胃肠道出血、溃疡等不良现象，并且研究发现阿司匹林丁香酚酯的ＬＤ５０为１０．３９ ｇ／ｋｇ，而阿司匹林的ＬＤ５０为１．５ ｇ／ｋｇ，丁香酚的ＬＤ５０为２．６８ ｇ／ｋｇ，相比较阿司匹林丁香酚酯有明显的低毒优势［４］。对其相关药效试验研究发现，该药有一定的抗菌性，具有与前体药相同的抗炎镇痛作用［５］，且其解热效果显著优于前体药。为了使阿司匹林丁香酚酯更好地用于临床，使用半合成脂肪酸甘油酯为基质，将其制成栓剂，按照药典要求对其质量进行检测，以期能更好的应用于临床。
　　１仪器与试药
　　１．１试药
　　ＡＥＥ：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药工程重点实验室制备，半合成脂肪酸甘油酯（四川沪天化工有限公司）；乙醇、乙酸乙酯、乙腈（色谱纯，天津光复精细化工研究所）；甲醇（色谱纯，天津市福晨化学试剂厂）。
　　１．２仪器
　　电子天平（上海民侨电子天平厂）；恒温真空干燥箱（上海市实验仪器总厂）；ＢＣＤＥ／４型双孔电子恒温水浴锅（上海科析试验仪器厂）；SR-1型栓剂融变仪（天津大学实验仪器厂）；五孔圆锥形栓剂模（浙江诸暨制药设备厂）。高效液相色谱仪、２４８７型双通道紫外检测器、７１７型自动进样器、１５２５型泵（美国Ｗａｔｅｒｓ公司）；ＯＤＳ色谱柱：４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，
　　５ μｍ，ｋｒｉｏｍａｓｉｌ．ｏｄｓ－１，Ｓｃｉｅｎｈｏｍｅ公司。
　　２阿司匹林丁香酚酯栓的制备
　　称取４０ ｇ半合成脂肪酸甘油酯置蒸发皿中，于５０ ℃水浴加热熔化，加入过１２０目筛的阿司匹林丁香酚酯细粉０．９ ｇ，混匀备用。栓模合页分开，用棉签均匀涂上一层润滑液，合拢，将上述熔化基质与药物混合液倾入栓模中，液面稍溢出模口平面１～２ ｍｍ，待自然冷却至凝固，用刀削平，开启栓模，取出即得。每粒含药量３０ ｍｇ。
　　３质量控制
　　３．１性状
　　阿司匹林丁香酚酯栓剂为乳白色，圆锥形，表面均匀光滑。
　　３．２重量检查
　　随机取１０粒栓剂，称得其总重为１３．２１ ｇ，平均粒重１．３２ ｇ，每粒重量与平均重量的差异为±３．４％，未超出±５．５％。
　　３．３融变时限
　　取本品６粒进行融变时限检查，结果均在６０ ｍｉｎ内全部融化，符合中国药典２０００年版二部栓剂项下的规定。
　　３．４含量测定
　　３．４．１测定波长的选择取一定量的阿司匹林丁香酚酯，加色谱级甲醇制成１０ μｇ／ｍＬ的溶液，按分光光度法（＜中华人民共和国药典＞２０００版二部附录ⅣＡ）在波长２００～４００ ｎｍ扫描。结果阿司匹林丁香酚酯在２３０ ｎｍ和２７９ ｎｍ处有最大吸收，为消除溶剂峰的干扰，选择响应较强的２７９ ｎｍ作为检测波长（图１）。
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　　３．４．３方法专属性考察对阿司匹林丁香酚酯、辅料及其降解产物采用高效液相色谱测定，结果流动相不干扰主药峰，阿司匹林、丁香酚与阿司匹林丁香酚酯分离度良好，本法专属性良好（图２）。
　　３．４．４标准曲线的制备精密称取阿司匹林丁香酚酯２５ ｍｇ，置１００ ｍＬ容量瓶中，加入色谱甲醇５０ ｍＬ，振摇并溶解后加色谱级甲醇至刻度，摇匀，作为贮备液；精密量取该贮备液０．２、０．４、１．０、２．０、４．０、１０．０、２０．０ ｍＬ分别置于５０ ｍL容量瓶中，用色谱级甲醇定容，摇匀；每个样品吸取少量过滤、测定，记录峰面积。经计算得回归方程和相关系数为＝２１．０９６Ｘ－１．９４３ ８，ｒ＝０．９９２ ３。阿司匹林丁香酚酯质量浓度在２～２０ μｇ／ｍＬ范围内，峰面积与质量浓度呈较好的线性关系。
　　３．４．５最低检测限测定在确定的色谱条件下，按信噪比为３对最低检测限进行测定。结果显示在质量浓度为０．１ μｇ／ｍＬ、进样１０ μＬ时，阿司匹林丁香酚酯信号峰约为噪音的３倍，即最低检测限为１ ｎｇ。
　　３．４．６含量测定取三批阿司匹林丁香酚酯栓，精密称取适量，加入乙酸乙酯溶解，吸取适量（相当于ＡＥＥ １．０ ｍｇ）置于试管中用液氮吹干，在试管中加入甲醇超声溶解多次，将溶解液倒入１００ ｍＬ容量瓶中，反复多次，最后加甲醇至刻度，摇匀作为供试品溶液。取出１０ μＬ注入液相色谱仪，记录色谱图；另取精制阿司匹林丁香酚酯适量，精密称定，用甲醇制成１０ μｇ/mL阿司匹林丁香酚酯的溶液，同法测定，以峰面积计算供试品中ＡＥＥ的含量（表１）。
　　３．４．７重复性试验对同一批样品进行含量测定，重复６次。经计算得阿司匹林丁香酚酯的ＲＳＤ值为０．２３％，该方法重现性良好。
　　３．４．８稳定性试验按３．４．６方法配制供试液，室温放置，分别在２、４、６、８、１０、１２ ｈ进样，计算峰面积。以峰面积计算，其ＲＳＤ为０．２９％。ＡＥＥ栓在１２ ｈ内基本无变化。
　　３．４．９回收率试验取同一批已知含量的阿司匹林丁香酚酯栓供试品，按上述条件计算回收率。结果见表２。
　　３．５局部刺激试验
　　按照《中华人民共和国卫生部新药临床前指导原则》中对刺激性试验的要求［6］，选择健康成年白兔９只，体重（２．５±０．５）ｋｇ，常规饲养，将试验家兔分为３组：空白组、阿司匹林丁香酚酯组、基质组，将栓剂塞入兔肛门，每天1栓，连续１周，于给药后第一、二、七天处死各组中家兔1只，解剖观察直肠黏膜变化，同时观察试验期间家兔活动、精神、食欲等状况。结果显示，试验期间家兔活动、精神及食欲均正常，剖检直肠黏膜无眼观变化。
　　４讨论
　　该试验表明阿司匹林丁香酚酯栓质控标准明确，稳定性好，无刺激性，且经临床疗效观察，可快速降低发热犬猫的体温，未见不良反应，使用可靠，可在临床上推广应用。
　　
　　参考文献：
　　［１］ 卢丹，李平亚．丁香属植物的化学成分和药理作用研究进展［Ｊ］．长春中医药大学学报，２００１，１７（４）：５８－６１．
　　［２］ 彭宅彪，张琼光，代虹健，等．丁香酚的药理学研究进展［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（１０）：２０７９－２０８１．
　　［３］ 李剑勇．阿司匹林丁香酚酯药用化合物制剂及其制备方法［Ｐ］．中国专利：２００８１００１７９５０．Ｘ，２００８－１０－０１．
　　［４］ 王棋文，李剑勇，牛建荣，等．炎毒热清及其微乳制剂小鼠急性毒性试验和体外抑菌作用［Ｊ］．安徽农业科学，２００８，３６（３６）：１５９１２－１５９１４．
　　［５］ 李剑勇，于远光，王棋文，等． 炎消热清的镇痛作用及其机理研究［Ｊ］．畜牧与兽医，２０１０，４２（１０）：２０－２４．
　　［6］ 国家药典委员会．中国药典（第二部）［Ｍ］． 北京：化学工业出版社，２００５，附录７．
　　
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