菌种保藏的原理和方法探讨|菌种保藏的原理及常用方法

　　中图分类号：Q93 文献标识码：A　　【摘 要】菌种是一个国家的重要资源，世界各国都对菌种的保藏极为重视。许多国家都建立了自己的菌种保藏机构，对菌种保藏的原理和方法进行了广泛的研究。
　　【关键词】菌种 保藏 原理 方法
　　微生物是具有生命的，其世代周期一般很短，在传代过程中容易发生变异、污染甚至死亡，因此常常造成生产菌种的退化，并有可能使优良菌种丢失。菌种保藏的重要意义就在于如何保持优良菌种其优良性状的稳定，满足生产的实际需要。
　　一、菌种保藏的原理
　　菌种保藏主要是根据微生物生理生化特点，人工地制造环境条件，使微生物代谢处于不活泼，生长繁殖受抑制的休眠状态，以减少菌种的变异。一般可以通过降低培养基营养成分、低温、干燥和缺氧等方法，达到防止突变、保持纯种的目的。[1]
　　二、菌种保藏的方法
　　菌种的保藏方法很多，一种好的保藏方法除了能长期保持菌种原有的优良性状不改变外，还应简便、经济，以便在生产上能广泛使用。常见的保存方法有定期移植法、矿油封藏法、沙土管法干燥保藏法、冷冻真空干燥法等。
　　（一）定期移植法
　　将菌种接种于所要求的培养基上，在最适温度中培养，至静止期或产生成熟的孢子时，置入 5℃的冰箱(或冰库)保存。在培养和保存的过程中，由于代谢产物的累积而改变了原菌的生活条件，结果菌落群体中的个体就不断衰老和死亡，因此每5～15天或 1～4个月重新移植一次﹐具体间隔时间因种而异。凡能人工培养的微生物都可用此法保存。此法不需特殊设备，但烦琐，费时，而且经常移植容易引起菌种退化。[2]
　　（二）矿油封藏法
　　将化学纯的液体石蜡(矿油)经高压蒸气灭菌，放在40℃恒温箱中蒸发其中的水分，然后注入斜面培养物中，使液面高出斜面约 1厘米。将试管直立，放在15～20℃室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体，既能隔绝空气，又能防止培养基因水分蒸发而干燥，可以延长菌种保藏的时间。但注入的液体必须不与培养基混溶﹑对菌种无毒﹐不易被利用和挥发。此法适用于酵母菌﹑芽孢杆菌；不适用于固氮菌﹑乳酸杆菌﹑明串珠菌﹑法门氏菌和毛黴目中的大多数属种。此法简便易行﹐但必须注意防火和污染。
　　（三）沙土管法干燥保藏法
　　这种保藏法适用于产生孢子的丝状真菌和放线菌，或形成芽孢的细菌。其原理是将沙或土过筛、烘干、装管、灭菌然后将菌种制成孢子悬液滴入其中混匀，放到盛氯化钙的干燥器里吸除水分，干燥后保存或用火焰封管後保存。吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而处于休眠状态，可保存较长时期。此法适用于芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、放线菌、镰刀菌等。[3]
　　（四）冷冻真空干燥法
　　这种菌种保藏方法的保藏期长、变异小、适用范围广，是目前较理想的保藏方法，是各保藏机构广泛采用的主要保藏方法。将细胞悬液每0.1～0.2毫升注入一无菌安瓿瓶﹐于-40℃预冻1小时，再于-20～30℃﹑真空度为13.3帕的条件下脱水。在脱水过程後期，安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水後的样品含水量应在 3%以下。最后，将安瓿瓶保持真空度 1.3帕，用火焰溶封，置10℃保存。为防止细胞在冻结和脱水过程中损伤或死亡﹐要用保护剂制备细胞悬液。保护剂有脱脂牛奶、血清、10%蔗糖或葡萄糖溶液等，其作用是通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型。此法适用于病毒、衣原体、枝原体、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等的长期保存，是当前保藏菌种的一个重要方法。但是，盐杆菌、发光杆菌、黏杆菌、阿舒囊黴、多囊黴、担子菌中的大多数属种不适用于此法保存。
　　
　　参考文献：
　　[1] 曹军卫 马辉文.微生物工程[M]北京：科学出版社2002（8）
　　[2] 诸葛健;;菌种保藏技术[J];酿酒;1980年01期
　　[3]方善康;;微生物菌种保藏的进展[J];中国酿造;1983年01期
　　
　　作者简介：
　　査杰（1984.12—），男，重庆涪陵人，生物技术助教。研究方向：微生物检验。