木立芦荟的功效与作用_木立芦荟茎段离体培养再生植株的研究

　　摘要：以木立芦荟（Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）幼嫩茎段为外植体，进行了不定芽诱导及生根的研究。结果表明，以０．１ g/100mL升汞处理外植体１０ｍｉｎ的灭菌效果最佳；ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的激素组合的出芽率为３６％；筛选出木立芦荟最佳生根培养基为ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ。
　　关键词：木立芦荟；茎段；诱导生根；植株再生
　　中图分类号：Ｑ９４３．１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2565-03
　　
　　Ｉｎ Vｉｔｒｏ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ
　　
　　ＣＡＩ Ｘｉａｏ－ｄｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｊｉｎ－ｊｉｎｇ
　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｇａｒｄｅｎｉｎｇ，Ｙａｎｇｔｚｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｇｚｈｏｕ ４３４０２５，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）
　　
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｙｏｕｎｇ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒ ｓｈｏｏｔｓ ａｎｄ ｒｏｏｔｓ． Ｉｔ ｗａｓ ｐｒｏｖｅｄ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｙｏｕｎｇ ｓｔｅｍｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ０．１ g/100mL ＨｇＣｌ2 ｆｏｒ １０ ｍｉｎ． ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｃｌｕｓｔｅｒ ｓｈｏｏｔｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｓ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｈｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅａｃｈｅｄ ３６％． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｒｏｏｔ－ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｗａｓ ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ．
　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ； ｓｔｅｍ； ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
　　
　　芦荟（Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）是百合科芦荟属多年生肉质草本植物，除具有观赏价值外，在药品、化妆品及食品等方面具有广阔的研究和开发前景［１－３］。
　　我国的芦荟生产发展潜力巨大，拥有着良好的资源开发优势。发展芦荟产业，首先要解决种苗繁殖问题。芦荟一般不能自身授粉结实，虽然人工措施处理后可以获得种子，但种子小而少，育苗困难。传统扦插和分株繁殖速度较慢，而且易使病毒积累。影响植株生长，造成品种退化［４，５］，难以满足芦荟规模化种植发展的需要。组织培养方法具有用材少、方便�繁殖系数高�可周年生产并能保持优良种性等优点，目前芦荟离体快繁技术已有一些报道［６－１０］。
　　本研究以木立芦荟（Ａ． ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）为试材，探讨了不同激素及其浓度配比对其茎段离体培养再生植株的影响。
　　１材料与方法
　　１．１材料
　　木立芦荟（Ａ． ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）来源于长江大学设施园艺实习基地。
　　１．２外植体灭菌及芽诱导
　　取１～２年生幼苗，剥去外层老叶后，用洗衣粉漂洗１０ ｍｉｎ，流水冲洗６０ ｍｉｎ。切取幼嫩茎段后先用体积分数为７５％的乙醇浸泡１０ ｓ，再用０．１ g/100mL升汞浸泡（设１０ ｍｉｎ和１５ ｍｉｎ两种处理）后，用无菌水清洗５次。将灭菌后茎段切割成０．５ ｃｍ长后接种于芽诱导培养基ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ中，每处理接种２４瓶（每瓶接种１个外植体）。培养室温度为（２５±２）℃，光照强度为２ ０００～３ ０００ ｌｘ，每日光照１４ ｈ。３０ ｄ后统计污染率（接种污染数／接种总数）、死亡率（死亡数／接种总数）及启动率（未污染外植体启动数／接种总数）。
　　１．３生根诱导与移栽
　　共采用４种培养基用于生根诱导，每种培养基均添加０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，探讨６－ＢＡ对根诱导的影响。４种培养基为Ａ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ�Ｂ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ�Ｃ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ以及Ｄ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ。所有培养基都添加８．０ ｇ／Ｌ琼脂＋３０．０ ｇ／Ｌ蔗糖＋０．２ ｇ／Ｌ活性碳，ｐＨ值为５．８。将丛生芽切成单芽分别转至上述培养基中。每处理接种８瓶（其中每瓶接种１个外植体），重复３次。待根长到１５．０ mｍ左右时，将培养瓶移到光照培养箱进行炼苗。先用流水洗净试管苗根周围的琼脂，移栽到基质中。移栽基质为珍珠岩∶河沙∶草炭土＝１∶1∶１（Ｖ∶Ｖ∶Ｖ）。３０ ｄ后观察成活率（成活率＝成活株数／总株数）。
　　２结果与分析
　　２．１不同灭菌时间对外植体的影响
　　0.1 g/100mL升汞处理时间长短对木立芦荟茎段的成活及灭菌效果有十分明显的影响。试验结果表明（表１），使用７５％酒精处理１０ｓ后再用0.1 g/100mL升汞处理时间过长（１５ ｍｉｎ）虽然污染率较低（８．３％），但死亡率较高（５８．３％）；而用０．１ g/100mL升汞处理１０ ｍｉｎ的效果最佳，外植体启动率达４１．７％。
　　２．２不定芽的再生
　　将茎段接种于ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ培养基上，培养３０ ｄ后观察发现，部分茎段再生了单芽（图１ａ）和大量丛生芽（图１ｂ），出芽率达３６％。这些芽颜色浓绿，生长旺盛。
　　２．３不同浓度６－ＢＡ对单芽生根的影响
　　不同浓度６－ＢＡ对单芽生根有较大影响。将丛生芽切割后转移到生根培养基上培养，结果如表２所示，研究表明，就生根率而言，培养基Ａ�Ｂ及Ｄ上单芽生根效果较好，在培养基Ａ和Ｄ上几乎所有单芽均再生了根，而培养基Ｂ上所有芽均成功诱导了根的再生；就开始生根天数而言，转移到培养基Ｃ和Ｄ上单芽最早生根时间出现在培养后第５天，而另外两种培养基上培养的芽均在１６ ｄ后才分化出根；就根系质量而言，６－ＢＡ的浓度越大，诱导生根的数量就越多（图１ｃ），培养基Ｄ上单芽平均生根数最多，其次为培养基Ｃ和Ｂ，虽然培养基Ｂ上单芽平均生根数最少，但其平均根长达３５．３ ｍｍ。总而言之，在ＮＡＡ浓度为０．２ ｍｇ／Ｌ时，６－ＢＡ的浓度越高，单芽开始生根天数越短，平均生根数越多，而对生根率及平均根长影响较小。
　　根系的好坏直接影响移栽试管苗的成活率。如表２所示，木立芦荟试管苗移栽成活率与再生根数量有关。单芽生根数越多，其植株移栽成活率也最高。综上所述，培养基Ｄ是本研究中的最佳生根培养基。目前，这些木立芦荟试管苗在温室中生长良好。
　　３小结
　　芦荟对外源激素的适应范围较广，不同外源植物激素对芦荟组织培养有不同影响［１０－１２］。有研究表明，高浓度ＮＡＡ有利于提高生根条数，从而有利于提高移栽成活率［１２］。本试验以木立芦荟茎段为外植体诱导丛生芽，使用了４个浓度分别为０．０�１．０�３．０及４．５ ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ和０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ自由组合，以观察其对芦荟单芽诱导生根的影响。结果表明
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　　注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
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